卵巣癌における糖転移酵素C2GnT1発現と機能の解析

2018 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 17K16841
• Research Institution: Shinshu University
• Principal Investigator: 山田 靖 信州大学, 学術研究院医学系(医学部附属病院), 助教 (60646652)
• Project Period (FY): 2017-04-01 – 2020-03-31
• Keywords: C2GnT1 / 卵巣癌 / Oグリカン鎖 / 明細胞癌 / 粘液性癌

Outline of Annual Research Achievements

糖鎖のうち、O-グリカン鎖のcore2分枝構造の形成に係わる酵素Core 2 β1-6 N-acetylglucosaminyl transferase 1 (C2GnT1)は、腫瘍細胞の悪性形質の獲得に重要な役割をもつと考えられている。我々はこれまでに子宮内膜癌において、C2GnT1高発現が独立した予後因子であることを報告した。本研究では、卵巣癌におけるC2GnT1発現とそれにより形成される糖鎖構造の機能を解析し、新規治療ターゲットとなる可能性を検討することを目的とする。卵巣癌組織においてC2GnT1抗体を用いた免疫染色による検討では、腫瘍細胞中の染色陽性細胞の割合は、漿液性癌 26.8、明細胞癌 72.5、類内膜癌 47.5、粘液性癌 66.8 と、漿液性癌で低く、明細胞癌、粘液性癌で高い傾向を認め、組織型により発現が異なると考えられた。卵巣癌全体での予後解析では、陽性率の高低と予後との関連性は認められなかったが、一般的に抗がん剤耐性である明細胞癌、粘液性癌で発現が強いことから、抗がん剤耐性への関与が考えられた。また細胞株での検討では、子宮内膜癌細胞株HHUA、Ishikawa、HEC1B、卵巣癌細胞株ES2、A2780、OVCARでのC2GnT1 mRNAおよび蛋白発現をRT-PCR、Western blottingで確認した。これらの卵巣癌細胞株に対し、C2GnT1 mRNA導入による強制高発現細胞、およびCRISPR-Cas9法での同遺伝子knock-out (KO)細胞を作成してきた。今後、これらの細胞による機能解析を開始していく予定である。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

細胞株におけるC2GnT1の発現抑制について、やや手間取ったが、CRISPR法でknock-outとすることにした。今後、これらの細胞を用いて機能解析を行っていく予定である。

Strategy for Future Research Activity

基本的に実験計画に沿って、研究を進めていく。主に細胞株を用い、強制高発現および、CRISPR法によるknock-outによるC2GnT1発現変化の細胞機能への影響や糖鎖発現状態の変化について検討を進める。C2GnT1による細胞表面の糖鎖構造は、免疫応答に影響する可能性が考えられることから、ヌードマウスへの異種移植により、腫瘍増殖能だけでなく、NK細胞活性の変化についても検討を行う。