2018 Fiscal Year Research-status Report
Regenerative effect of a ROCK Inhibitor, Y-27632, on excitotoxic trauma in an organotypic culture of the cochlea
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17K16887
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| Research Institution | Yamagata University |
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Principal Investigator |
小泉 優 山形大学, 医学部, 非常勤講師 (80723585)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 蝸牛 / 聴神経 / 器官培養 / 再生 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
現在、内耳再生に関する研究領域において聴神経の障害が注目されている。これまで感音難聴の成因に関する研究から、有毛細胞の障害が主な原因であると考えられていたが、近年になりいくつかの病態においては有毛細胞の障害よりも前に聴神経の障害（聴神経-有毛細胞間シナプスの障害）が起こっていることが確認されたためである。
本研究では蝸牛器官培養系を用いて聴神経障害モデル（聴神経線維および聴神経-有毛細胞間シナプスが障害され、聴神経の胞体および内外有毛細胞は残存している状態）を作製し、聴神経の再生を試みる。
wangらの報告を基に、NMDA 0.5 mMとKainic acid 0.5 mMの2種類の薬剤 (NK処理) を使用し、培養液中で2時間反応させることで聴神経障害モデルの作成を試みた。コラーゲンコートもしくはpoly-L-lysine+Lamininコートによる接着培養、コラーゲンゲルによる3次元培養、コーティングなしでの単純培養などの培養方法を用いて、聴神経障害モデルを作製したところ、いずれの培養方法においても、聴神経線維および聴神経-有毛細胞間シナプスが障害され、聴神経の胞体および内外有毛細胞は残存している状態が再現できた。
また、神経保護効果および神経・シナプス再生作用を有するとされるRho associated coiled-coil containing protein kinase (ROCK) 阻害薬を聴神経障害モデルに作用させることで、一度障害された聴神経が伸長している可能性が示唆された。
本年度の研究により、ROCK阻害薬が聴神経障害モデルにおいて障害された聴神経に作用する可能性が示唆されたため、シナプス形成に対する作用など、さらなる詳細を解析中である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本研究ではもともと長期培養の条件を用いて聴神経の再生について検討する予定であったが、1週間以上の培養では聴神経が脱落してしまう状態であった。しかしながら短時間で作用する薬剤の検索を行ったところ、短期培養での障害モデルの作製に成功した。当初の予定から変更となっているが、研究の継続は可能と判断した。
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| Strategy for Future Research Activity |
前述のとおり、神経保護効果および神経・シナプス再生作用を有するとされるRho associated coiled-coil containing protein kinase (ROCK) 阻害薬を聴神経障害モデルに作用させることで、一度障害された聴神経が伸長している可能性が示唆された。
本年度の研究により、ROCK阻害薬が聴神経障害モデルにおいて障害された聴神経に作用する可能性が示唆されたため、今後はこの実験系を用いて作製した標本を、主に免疫染色および共焦点レーザ顕微鏡により解析し、聴神経線維およびシナプスに対するROCK阻害薬の作用について、さらに詳細に検討する。
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| Causes of Carryover |
（理由）
おおむね予定通りの支出であったが、消耗品などのための費用に若干の繰り越しを生じた。
（使用計画）
引き続き、培養実験の使用する細胞や培地などの消耗品、及び実験動物の購入、また学会発表や論文投稿の費用として使用する。
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