2017 Fiscal Year Research-status Report
中咽頭癌個別化医療のためのクリニカルシーケンス導入の試み
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17K16904
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| Research Institution | Hamamatsu University School of Medicine |
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Principal Investigator |
今井 篤志 浜松医科大学, 医学部附属病院, 助教 (30794309)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | HPV関連癌 / リキッドバイオプシー / 中咽頭癌 / メチル化 / 循環腫瘍DNA |
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| Outline of Annual Research Achievements |
同意を得た中咽頭癌患者5例から組織サンプル（生検または手術）と末梢血10mlを採取した。組織サンプルからp16免疫染色とTaKaRa PCR Human Papillomavirus Typing Set によるHPV解析をおこなったところ, 全例HPV関連癌であった。末梢血から血漿を分離して、QIAamp DNA Mini Kit(Qiagen, Valencia, CA)を用いてDNAを抽出した。微量であるためにまずDNA量のみを測定した。DNA量は検出可能であった。治療後も経時的（3ヵ月毎）にリキッドバイオプシーをおこなった。経時的な推移を確認できたものは3例、治療内訳は①手術→術後化学療法併用放射線治療, ②手術単独治療, ③化学療法併用放射線治療であった。①は術後低下したが、術後化学療法併用放射線療法終了後に増加してきた。②は手術直後にやや増加したが、経過中に治療前の量に戻った。③は化学療法併用放射線療法後に増加した。全例で再発は認めていない。治療方法が異なるために現段階では傾向は明らかではなく，症例の蓄積が必要であると考える。今後はサンプルDNAにバイサルファイト処理をおこない，メチル化および非メチル化されている塩基を特異的にPCR増幅してメチル化の解析をおこなう。シーケンス間と組織・血液間でのメチル化の相違性を検討する。E-cadherin, TAC1, GALR1, COL1A2遺伝子を解析する予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
中咽頭癌患者の確保はできているが、対象患者数を増やす必要がある。組織サンプルや血漿中からDNAを抽出することができている。P16免疫染色やHPV解析でHPV関連癌と非関連癌の分類ができている。抽出できるDNAが微量であるが、QIAamp DNA Mini Kit(Qiagen, Valencia, CA)で得られたDNAからのメチル化解析は可能である。
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| Strategy for Future Research Activity |
同意を得た中咽頭癌患者より組織サンプル（生検または手術）と末梢血から分離した血漿からDNAを抽出してメチル化解析をおこなう。対象症例を増やす。治療前後や再発時を含めたリキッドバイオプシーの経時的変化について解析する。E-cadherin, TAC1, GALR1, COL1A2遺伝子を解析する。
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| Causes of Carryover |
症例サンプル数を増やすために解析費用が増加する。治療前後や再発時を含めたリキッドバイオプシーの経時的変化について解析する。E-cadherin, TAC1, GALR1, COL1A2遺伝子を解析する。解析して得られた結果を学会などに報告していく。
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