Experimental research of elastic fiber regeneration accelerated by fragment protein of latent TGF-beta binding protein 4.

2018 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 17K17014
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: 綾 梨乃 京都大学, 医学研究科, 客員研究員 (90469643)
• Project Period (FY): 2017-04-01 – 2019-03-31
• Keywords: 弾性線維 / コラーゲンスポンジ / LTBP-4 / 線維芽細胞

Outline of Annual Research Achievements

平成29年度の研究において弾性線維の形成促進を確認できた、latent TGF-β binding protein 4 (LTBP-4)リコンビナント蛋白を複合化したコラーゲンスポンジについて、さらに検討をすすめた。平成29年度の検討の結果を受けて、コラーゲンスポンジに複合化するLTBP-4の濃度をそれぞれ0、1、5μg/cm2としてコラーゲンスポンジに含侵し、再凍結乾燥する事により基材を作成した。この基材においてヒト皮膚由来の線維芽細胞（passages 5-8）の培養を3週間行い、免疫組織学的染色にて弾性線維の形成を確認した。3シリーズ終了した時点で結果を検討したところ、複合化スポンジ作成後、一定期間を超過すると弾性線維の形成促進作用が失われる可能性が示唆された。その後、LTBP-4複合化基材を作成後、早期に使用するよう改善することにより弾性線維の形成促進作用が確認できた。LTBP-4複合化基材においては1、5μ/cm2いずれにおいても、0μg/cm2の基材と比較して1.5-2倍の厚みで弾性線維の形成を認めた。LTBP-4複合化基材を作成後、弾性線維の形成促進作用が失活するまでの期間については、さらに検討を要する。
上記にて形成された弾性線維を三次元的に評価する方法として2光子顕微鏡を用いた検討を行った。これにより弾性線維の描出は可能であったが、より明瞭な評価のためにはさらなる検討が必要である。
2年間を通じ、弾性線維可能なLTBP-4のフラグメントタンパクの同定には至らなかったが、上記の新規基材の開発を行い、弾性線維再生の実用化により近付いた。