2017 Fiscal Year Research-status Report
口腔扁平上皮癌の浸潤・転移におけるPD-L1/PD-1シグナルの関与
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17K17264
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
丸瀬 靖之 九州大学, 歯学研究院, 共同研究員 (90784504)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | PD-L1 / PD-1 / 抗免疫チェックポイント分子抗体療法 / 口腔扁平上皮癌 (OSCC) |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究は OSCC において PD-L1/PD-1 シグナルを介した増殖・浸潤・転移の分子機構を解明するための基盤となる研究を行うことを目的としている。
これまで我々は、OSCC生検組織の免疫組織化学的染色法を用いて、OSCCにおいてPD-L1/PD-1 シグナルが免疫抑制を引き起こし、OSCC の浸潤・転移に関与すること、及びOSCC組織でのPD-L1/PD-1 共発現が有意に生存率を低下させていることを明らかにしてきた。また、PD-L1 過剰発現株（SAS細胞）にrecombinant human PD-1 (rhPD-1) を作用させ、PD-1 から PD-L1 へのシグナル伝達は OSCC の増殖を促進すること、同様にOSCC の遊走能・浸潤能を亢進することに関しても明らかにしてきた。
そこで、本年度においては、SAS細胞に rhPD-1 を作用させた際に変動する遺伝子の発現を、DNA マイクロアレイを用いてプロファイリングし、OSCC の増殖・浸潤・転移における標的遺伝子の特定を行なった。
その結果、SASと比較して、SAS+PD-1において、腫瘍細胞の生存、遊走、分化などの機能を制御する中心的役割を担うActivaor Protein-1(AP-1) familyのうち、FosBの発現上昇（Zscore:7.618, Ratio:10.44）を認めた。また、同様にTNF Signaling pathwayにおいて、AP-1より下流の遺伝子群（Fos,Jun,Cxcl1,2,3,etc）の発現上昇が認められた。また、細胞外基質を分解し、腫瘍の浸潤・転移に寄与すると考えられるマトリックスメタロプロテアーゼのうち、MMPー3及びMMP-10に関しても同様に発現上昇を認めた。
これらのことより、PD-1はOSCCに発現しているPD-L1に作用することにより、OSCC細胞中のTNF Signaling Pathwayを活性化してOSCCの遊走及び浸潤を亢進することでOSCCの悪性化に寄与している可能性が示唆された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
当初の計画では、標的遺伝子及びタンパク質の発現定量、およびこれらの発現抑制・過剰発現による機能解析までを本年度で終了する予定であった。しかしながら、現状では遺伝子発現プロファイリングまでしか終了していない。
これは研究代表者の研究施設からの異動、及び研究協力者との連携不足が遅延理由と考えられる。
今後はより密な連携を図り、研究を継続していく予定である。
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| Strategy for Future Research Activity |
次年度以降、マイクロアレイによって得られた結果より、標的遺伝子発現について qPCR およびリアルタイムPCR を用いた定量を行う。また、標的タンパクについてウェスタンブロット法にて発現を検索し、免疫細胞化学的染色法にて in vitro における局在を確認する。
また、SAS 細胞と rhPD-1 を用いて、下記の様に標的遺伝子の発現制御を行い、機能解析を行う予定である。
1)si RNA を用いた活性阻害による機能解析；SAS 細胞に rhPD-1 を作用させたのち、si RNA を用いて標的遺伝子の活性を阻害し、遺伝子の発現量の変化や表現型および増殖、遊走、浸潤能への影響を検討する。
2)過剰発現による機能解析；プラスミドベクターを用いて、SAS 細胞に標的遺伝子を過剰発現させ、遺伝子の発現量の変化や表現型および増殖、遊走、浸潤能への影響を検討する。
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| Causes of Carryover |
1.設備、備品費について；新規 DNA/RNA 染色試薬を使用し実験者の安全性を担保するとともDNA/RNA の損傷を大幅に低減するための青色 LED を使用したイルミネーター購入、及び本研究のデータ管理、統計作業を 遂行するためのパーソナルコンピューター本体と外付け記録装置購入は次年度以降へ延期した。
平成30年度以降行う予定である動物実験に際し小動物微小転移観察のため現在使用中の拡大鏡に付随するライトシステムを申請予定である。また、故障しているアスピレーター、ドライバス、プレート遠心機およびボルテックスミキサーについても必要であるため、研究用消耗品の費用に含めて申請する次第である。
2.旅費について;
研究代表者の現所属機関によって補填されたため、旅費に関しては使用額に差異が生じた。
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Research Products
(2 results)
