2018 Fiscal Year Annual Research Report
Molecular mechanisms of axis formation in plants mediated by the regulation of lateral diffusion of plasma membrane proteins
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17K17595
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| Research Institution | Tohoku University |
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Principal Investigator |
楢本 悟史 東北大学, 生命科学研究科, 助教 (30612022)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | オーキシン / PIN |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本年度は植物細胞の極性形成機構の解明を目指し、(1)PINの局在化に関わる分子機能未知遺伝子MAB4の解析 (2)細胞壁によるPINの局在化・クラスター形成制御の解析、(3)PINクラスター構成タンパク質の同定および機能解析、(4)PINの極性局在・クラスター化を制御する因子の探索・同定の4点から解析を行った。(1)では、昨年度の解析から、PINとMAB4が細胞膜上で共局在をすることを見出していた。本年度は両者が物理的に直接相互作用する可能性を考え、in vitro pull downによる実験を行った。しかしながら、positiveな結果は得られなかった。一方、PIN2-VenusおよびMAB4-CFP両発現体を用いたFRET解析により、予備的な結果ながら、直接の相互作用を示唆する結果を得ることに成功した。
(2)昨年度の解析から、細胞壁修飾酵素PMEＩの過剰発現では、PINクラスター形成が異常になることが示唆されている。PMEIの細胞内輸送機構を調べるために、PMEI-GFP発現体を作出した。しかしながら、PMEI-GFPは、発現量が弱く明確なシグナルは検出することはできなかった。
(3)昨年度、抗PIN1および抗PIN2抗体による免疫沈降実験を行ったが、うまくいかなかった。そこで本年度は、PIN1-GFPおよびPIN2-GFP発現体を用いた、免疫沈降実験に着手した。しかしながら、wesern blotの結果、免疫沈降がうまくいっていないことが明らかになった。
(4)昨年度の解析からvan6変異体の原因遺伝子候補を得ることに成功した。今年は、ひきつづき、それらの遺伝子のノックアウト変異体の表現型を解析を行い、候補遺伝子をせばめた。また、PINクラスターの形成に異常をきたす化合物の探索を行い、2つの化合物を同定することに成功した。
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