2018 Fiscal Year Research-status Report
The role of Wnt signaling underlying the regulation of undifferentiated spermatogonia
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17K17690
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| Research Institution | Institute of Physical and Chemical Research |
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Principal Investigator |
高瀬 比菜子 国立研究開発法人理化学研究所, 生命機能科学研究センター, 研究員 (40754528)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | Wntシグナル / 未分化型精原細胞 / 精子形成 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究計画では、精巣内の体細胞群、すなわちセルトリ細胞とライディッヒ細胞からのWnt分泌が、マウス精子幹細胞制御に果たす重要性を明らかにすることを目標にしている。
これまでの申請者らの研究から、精子幹細胞を含む未分化型精原細胞で古典的Wnt シグナルが活性化しており、これらの細胞増殖にWnt シグナルが寄与する可能性が示された。そこで、セルトリ細胞・ライディッヒ細胞特異的にWntリガンドの分泌が抑制されるマウス系統（以下Wls cKOマウス）を作出し、表現型解析を行った。昨年度行った予備的実験結果では妊性の低下が観察されていたものの、サンプル数を大幅に増やして行った野生型雌との交配実験では、妊性および産仔数の低下は見られなかった。さらに、Wls cKOマウスで疎な精細管が見られるという予備的実験結果についても再現性が得られず、未分化型精原細胞の細胞増殖についても対照群と差がなかった。その一方で、成体のWls cKOマウスでは精巣重量が有意に減少するという表現型は一貫して観察された。第一の可能性としては、研究代表者の異動に伴いマウスコロニーをクリーニングする必要があったため、マウスの遺伝的背景の変化によって不妊などの表現型が不顕性になっていることが考えられる。第二の可能性としては、体細胞由来のWntシグナルは、成体の精巣では分化型精原細胞の維持に関わっておらず、発生段階において最終的な精原細胞数の決定に関与していることが考えられる。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
研究代表者の異動により、研究環境の再構築および使用するマウス系統の移動に時間を取られたため、当初の計画を全て実行することはできなかった。また、Wls cKOマウスの表現型解析を進めたが、昨年度までに行った予備的実験結果の再現性が得られず、研究の進捗はやや遅れている。
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| Strategy for Future Research Activity |
Wls cKOマウスの表現型について予備実験の結果が再現されず、また、それゆえに当初計画していたHTVi（hydrodynamic tail vein injection）法によるWntタンパク質の過剰発現系や、Wnt受容細胞のトランスクリプトーム解析を遂行する実験的意義を問い直す局面に来ている。これまでは成体の精巣切片を利用した解析が中心だったが、精巣あたりの精原細胞数を計測するためにフローサイトメトリーを利用した実験系を立ち上げる、Wntシグナルのレポーターマウスを導入するなど、表現型を正しく評価して論文執筆へとつなげたい。
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| Causes of Carryover |
本年度は主に免疫染色と組織化学的解析により遺伝子改変マウスの表現型を精査したが、前年度までの予備的実験結果の再現性が得られず、研究内容の再考とHTVi実験等の中止を余儀なくされた。一部実験の中止とデータ不足による学会発表の見送りによって未使用額が生じた。このため、次年度にはレポーターマウス導入等の実験および学会発表を行うこととし、未使用額はその充填に充てることとしたい。
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Research Products
(1 results)
