2017 Fiscal Year Research-status Report
ADAMTS9の機能と分化調節メカニズムについての研究
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17K18135
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| Research Institution | Tokyo Women's Medical University |
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Principal Investigator |
茂泉 佐和子 (吉名佐和子) 東京女子医科大学, 医学部, 講師 (00424672)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | ADAMTS9 / C.elegans / 小胞体 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
これまでADAMTS9が細胞外だけではなく、ER内で機能し、ADAMTS9の発現抑制により、ER-Golgi間の蛋白質輸送が阻害されること、この機能はC末端にあるGONドメインが重要であることを見いだした。さらに、C.elegansにおいてADAMTS9/GON-1発現抑制により、「分泌蛋白質の蓄積(2時間後) → ERストレスの負荷（5時間後）→ ERの形態変化（24時間後）」の順で細胞に著しい変化が起きることを既に明らかにした(2012. 発表済み)。このため、細胞内におけるADAMTS9/GON-1の作用点を解明するためには、ADAMTS9/GON-1の機能を抑制した直後に起きる細胞の変化を調べる必要があった。そこで平成２９年度の研究計画に基づき、KillerRedを融合したGONドメインをHEK293に発現させ、緑色光を照射し、GONドメインが失活した直後に起こる細胞の変化を検討した。その結果、GONドメインが失活した直後に、細胞質のカルシウムイオン濃度が上昇することを明らかにした。さらに、様々な阻害剤を用いた実験より、そのカルシウムイオンはERから出てきたものである可能性が高いことを見いだした。この結果より、GONドメインが欠損することにより、ER内のカルシウムイオンの恒常性が保たれなくなることが、ER-Golgi間の小胞輸送が正常に行われない原因であることが示唆された。
また平成３０年度以降の研究計画に基づき、免疫沈降法を用い、gon-1変異体の表現型を抑圧する遺伝子産物の中から、GONドメインと結合する蛋白質を見いだした。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
研究計画に示した通り、細胞内におけるADAMTS9/GON-1作用点を解明しつつあるため。さらに、次年度に計画していた、GONドメインと結合する分子が見つかっているため。
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| Strategy for Future Research Activity |
GONドメインが失活することより、ERからカルシウムイオンが流出する可能性が示唆されているため、IP3レセプターとGONドメインとの関係を検討する。さらに、免疫沈降によってGONドメインを結合した蛋白質との関係も検討する。このために、免疫沈降法・ウエスタンブロット、抗体染色法を用いる。さらに、GONドメインを失活することにより、細胞質からERへのカルシウムイオンの取り込みが、どのように変化するかを検討する。STIM1・Orai1が関与するSOCEが変化しているか否かも検討する。
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| Causes of Carryover |
次年度使用額が生じた理由
細胞培養と免疫沈降がスムーズに行えたため、使用した消耗品が少なかった。
使用計画
細胞培養用のスライドチャンバー、ガラスボトムディッシュ、トランスフェクション用の試薬の費用に充てる。さらに、免疫沈降用の抗体、ビーズの費用とする。
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Research Products
(5 results)
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[Journal Article] Somatic mutations and increased lymphangiogenesis observed in a rare case of intramucosal gastric carcinoma with lymph node metastasis.2018
Author(s)
Ikari N, Aoyama S, Seshimo A, Suehiro Y, Motohashi T, Mitani S, Yoshina S, Tanji E, Serizawa A, Yamada T, Taniguchi K, Yamamoto M, Furukawa T.
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Journal Title
Oncotarget
Volume: 9
Pages: 10808-10817
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Cysteine protease cathepsin B mediates radiation-induced bystander effects.2017
Author(s)
Peng Y, Zhang M, Zheng L, Liang Q, Li H, Chen JT, Guo H, Yoshina S, Chen YZ, Zhao X, Wu X, Liu B, Mitani S, Yu JS, Xue D.
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Journal Title
Nature
Volume: 547
Pages: 458-462
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
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