2018 Fiscal Year Research-status Report
ADAMTS9の機能と分化調節メカニズムについての研究
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17K18135
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| Research Institution | Tokyo Women's Medical University |
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Principal Investigator |
茂泉 佐和子 (吉名佐和子) 東京女子医科大学, 医学部, 講師 (00424672)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | ADAMTS9 / C.elegans / IP3R |
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| Outline of Annual Research Achievements |
これまでADAMTS9は細胞外だけではなく、ER内で機能し、ADAMTS9の発現抑制により、ER-Golgi間の蛋白質輸送が阻害されること、この機能はC末端にあるGONドメインが重要であることを見いだした(2012. 発表済み)。細胞内におけるADAMTS9/GON-1の作用点を解明するため、KillerRedを融合したGONドメインをHEK293細胞のゲノムに単コピーで挿入し、緑色光を照射し、GONドメインが失活した直後に起こる細胞の変化を検討した。その結果、GONドメインが失活した直後に、細胞質のカルシウムイオン濃度が上昇することを明らかにした。さらに、インバースタイプのカルシウムセンサーであるIP2.0を用い、そのカルシウムイオンはERから出てきた可能性が高いことを見いだした。
GONドメインがERのカルシウム恒常性維持に関与している可能性が示唆されたことから、IP3Rとの関係を検討した。免疫沈降法を用い実験を行った結果、GONドメインはIP3Rとは結合しなかったが、IP3Rのユビキチン化に関与する分子と結合した。そこで、ADAMTS9の有無によりIP3Rのユビキチン化が変化するか否かを検討した。
またC.elegansを用い、ITR-1（IP3Rの線虫ホモログ）のユビキチン化サイトを置換した変異体を作成した。このitr-1変異体は、gon-1（ADAMTS9の線虫ホモログ）の表現型を一部抑圧することを見いだした。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
研究計画に示した通り、ADAMTS9/GON-1と相互作用する分子を見つけ、そのタンパク質の機能から既知のメカニズムとの関連を見いだしたため。
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| Strategy for Future Research Activity |
GWASにより、ADAMTS9 は 糖尿病、加齢黄斑変性、高血圧、動脈瘤、などのリスク遺伝子であることが報告されている。そこで、ADAMTS9/GON-1の細胞内機能と疾患発症との関連を解析する。血管平滑筋などの培養細胞を用い、コラーゲンベース細胞収縮アッセイ等を行うことにより、ADAMTS9の機能阻害により、疾患に関連する表現型が見られるか否かを検討する。
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| Causes of Carryover |
細胞培養と免疫沈降などがスムーズに行えたため、使用した消耗品が少なかった。
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[Journal Article] UDP-N-acetylglucosamine-dolichyl-phosphate N-acetylglucosaminephosphotransferase is indispensable for oogenesis, oocyte-to-embryo transition, and larval development of the nematode Caenorhabditis elegans.2019
Author(s)
Kanaki N, Matsuda A, Dejima K, Murata D, Nomura KH, Ohkura T, Gengyo-Ando K, Yoshina S, Mitani S, Nomura K.
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Journal Title
Glycobiology
Volume: 29
Pages: 163-178
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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