2021 Fiscal Year Research-status Report
ADAMTS9の機能と分化調節メカニズムについての研究
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17K18135
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| Research Institution | Tokyo Women's Medical University |
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Principal Investigator |
茂泉 佐和子 (吉名佐和子) 東京女子医科大学, 医学部, 講師 (00424672)
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| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | C.elegans / ADAMTS9 / IP3 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
ADAMTS9の発現抑制により、ER-Golgi間の蛋白質輸送が阻害されること、この機能はC末端にあるGONドメインが重要であることを見いだした(2012. 発表済み)。細胞内におけるADAMTS9/GON-1の作用点を解明するため、KillerRedを融合したGONドメインをHEK293細胞のゲノムに単コピーで挿入した細胞株を作成した。この細胞に緑色光を照射し、GONドメインが失活した直後に起こる細胞の変化を検討した。その結果、GONドメインが失活した直後に、細胞質のカルシウムイオン濃度が上昇することが明らかになった。また、C.elegansを用いた実験により、細胞質のカルシウムイオン濃度は、IP3受容体を介して、ERからCa2+が流出するためと判明した。さらに、GONドメインを過剰発現させることにより、IP3刺激後の細胞質におけるCa2+濃度の上昇が抑制されることを見いだした。
GONドメインはIP3Rの機能を調節し、細胞内Ca2+の調節に関わっていると考え、IP3R関連因子のうち、GONドメインと直接結合する因子があるか否かを免疫沈降法により探索し該当する因子を見いだした。
ADAMTS9/GON-1の発現を抑制することにより、細胞内輸送に異常が見られることから、細胞内輸送に関わる因子、RSD-3またはEPN-1、との関係を検討した。
また、C.elegansを用いてトランスジェニックを作成する際に、染色体の指定した部位に多コピーのトランスジーンを挿入すると、その後の実験に便利である。これまで、トランスジーンを挿入すると表現型が現れるような染色体位置に、トランスジーンを、挿入する手法は確立した。今回、表現型が表れない染色体位置への挿入とその挿入確認方法を確立した（論文投稿中）。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
ADAMTS9の細胞内における機能をおおむね解明できた。現在論文を執筆中であるため。
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| Strategy for Future Research Activity |
GWASにより、ADAMTS9 は 糖尿病、加齢黄斑変性、高血圧、動脈瘤、などのリスク遺伝子であることが報告されている。そこで、血管平滑筋などの培養細胞を用い、ADAMTS9の機能阻害により、疾患に関連する表現型が見られるか否かを検討する。
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| Causes of Carryover |
C.elegansを用いた実験を多く行ったため、使用した細胞培養用の薬品が少なかった。
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