2018 Fiscal Year Research-status Report
| Project/Area Number |
17K18266
|
|---|
| Research Institution | Aino University |
|---|
Principal Investigator |
兼清 健志 藍野大学, 中央研究施設, 講師 (20525399)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2020-03-31
|
| Keywords | 脈絡叢上皮細胞 / 脊髄損傷 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
本研究の目的は、種々の栄養因子を含む脳脊髄液を産生している脈絡叢上皮細胞に着目し、脊髄損傷時におこる脈絡叢上皮細胞の応答を調べることで、本来持っている神経の自己再生メカニズムの一端を明らかにすることである。
前年度には、ラットの側脳室と第四脳室の脈絡叢を採取し、それぞれの脈絡叢上皮細胞の初代培養系を確立し、免疫細胞化学的な手法でタンパク質レベルでの発現の違いを比較検討したところ、側脳室由来の脈絡叢上皮細胞の多くは未分化マーカーとして知られるSox2を発現していたが、第四脳室由来の脈絡叢上皮細胞はSox2を全く発現していないことを明らかにした。
これを受けて、今年度はまず、側脳室と第四脳室由来脈絡叢上皮細胞のin vivoでの生理的な違いを調べるために、正常ラットの脳の凍結切片について免疫組織化学的な解析を行った。その結果、正常ラットではいずれの脳室の脈絡叢上皮細胞もほとんど未分化マーカーを発現しておらず、近傍の上衣細胞が発現していた。例外的に、SSEA-3は両脳室の脈絡叢上皮細胞の一部で発現が認められた。
次に、脊髄損傷による反応をみるため、圧挫損傷を与えたラットの脳の凍結切片について免疫組織化学的な解析を行った。その結果、Sox9は両脳室の脈絡叢上皮細胞に同程度発現が認められた。一方で、SSEA-3は第四脳室よりも側脳室の脈絡叢上皮細胞で発現が増加した。
これらのことから、in vivoでも脊髄損傷後に側脳室の脈絡叢上皮細胞で未分化マーカーの発現が高いことがわかった。今回、脊髄損傷から6週後（慢性期）のラットの脳のみを解析したため、今後さらに、急性期の脊髄損傷ラットも解析することで経時的な脈絡叢上皮細胞の反応を脳室ごとに明らかにしていく予定である。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
今年度は、前年度in vitroで明らかにした側脳室と第四脳室由来の脈絡叢上皮細胞の違いをin vivoで解析した。申請時は、先に脊髄損傷ラットの脈絡叢組織としての反応を発現遺伝子のプロファイリング等で網羅的に解析することを予定していたが、先に培養系を確立したことで結果として側脳室由来脈絡叢上皮細胞は未分化性があること、第四脳室由来脈絡叢上皮細胞は増殖能が高いことがわかったので、未分化マーカーをターゲットとしてin vivoでの解析が行え、その結果、in vivoでも脊髄損傷に応答して特に側脳室の脈絡叢上皮細胞で未分化マーカーの発現が上がることがわかった。このことは本研究の最終到達点である脈絡叢の神経自己修復への寄与の解明に近付けたと言える。来年度以降の具体的なストラテジーも決まったことは有意義であった。
|
| Strategy for Future Research Activity |
(1) 脊髄損傷モデルラットで側脳室と第四脳室の脈絡叢がそれぞれどのように反応するのかを損傷から経時的に、特に急性期を重点的に免疫組織化学やDNA microarray等で解析する。
(2) 培養細胞を用いて、側脳室由来脈絡叢上皮細胞が実際に各種細胞に分化するかを調べる。具体的には、側脳室由来脈絡叢上皮細胞を基本培地中で培養した後、神経細胞やグリア細胞への分化誘導培地に交換して培養を続け、最終的に免疫細胞化学染色でβ-tubulinやGFAP等の細胞マーカーを用いて分化を評価する。第四脳室由来脈絡叢上皮細胞との比較も行う。
(3) 側脳室および第四脳室由来脈絡叢上皮細胞の培養上清の神経突起伸長に対する効果の違いをラット海馬由来神経細胞初代培養系を用いて検討する。
|
| Causes of Carryover |
大阪北部地震により建物及び研究機器に多大な損害が出たため、一時期研究活動がストップしたため、本来行う予定であった実験にかかる消耗品を購入しなかったため。今年度、同様の実験を行うために使用予定である。
|
