2018 Fiscal Year Annual Research Report
Development of analysis method of inflammation-related proteins in serum using inflammatory cytokine receptors
| Project/Area Number |
17K18360
|
|---|
| Research Institution | Kazusa DNA Research Institute |
|---|
Principal Investigator |
川島 祐介 公益財団法人かずさDNA研究所, ゲノム事業推進部, 研究員 (30588124)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2017-04-01 – 2019-03-31
|
| Keywords | プロテオミクス / バイオマーカー |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
血清プロテオーム解析では血中のタンパク質濃度のダイナミックレンジが非常に広いため、超微量なサイトカインなどのタンパク質を観測することが難しく、炎症関連タンパク質の網羅的な分析は現状のプロテオーム解析法では困難を極める。そこで、本研究では炎症性サイトカイン受容体を用いて受容体に結合する炎症誘導・抑制タンパク質を濃縮し、高感度な液体クロマトグラフィー質量分析計（LC-MS）システムによって濃縮されたタンパク質を網羅的に分析する方法の開発を目指した。
まず、幅広い血中のダイナミックレンジの中から超微量な炎症誘導・抑制タンパク質のみを効率よく濃縮するために、遺伝子組換え技術を用いて炎症関連受容体（IL1RとIL6R）の細胞外領域とHalo tagを融合させたタンパク質を作り、Halo tagリガンドビーズに固定化したプローブを作成した。次にこのプローブを用いて受容体の対象となるIL1とIL6が濃縮できることの確認に成功した。また、LC-MS分析の方ではノンポーラス逆相カラムを用いて高感度LC-MSシステムの構築に成功した。この受容体を用いた濃縮法と高感度LC-MSシステムを組み合せることで炎症性サイトカイン受容体と結合する血中炎症関連タンパク質を高感度に分析することが可能となった。さらにこの分析系をCRP抗体陽性血清に応用した。また、ネガティブコントロールとしてHalo tagのみをビースに結合させたプローブについても同様の分析を行い、炎症受容体特異的に増加するタンパク質を探索した。その結果、既知のIL1、IL6以外の炎症受容体に結合するタンパク質を新たに9種類発見することに成功した。
|
