2017 Fiscal Year Research-status Report
病原体伝播を阻止するマダニの遺伝子改変ドライブの開発
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17K19328
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| Research Institution | Kagoshima University |
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Principal Investigator |
田仲 哲也 鹿児島大学, 農水産獣医学域獣医学系, 教授 (00322842)
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| Project Period (FY) |
2017-06-30 – 2019-03-31
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| Keywords | マダニ / ノックダウン / ノックアウト / 感染防御分子 / 遺伝子導入 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
[全体構想] 近年標的配列選択の自由度が高く、作製の簡便なCRISPR/Cas9ゲノム編集システムが開発され、これまで標的遺伝子の改変が困難であった生物でのゲノム編集が可能となった。しかし、マダニ遺伝子機能の解析ではRNA干渉法による遺伝子破壊が用いられてきたが、ノックアウト技術は確立できていない。そこで、研究代表者はCRISPR/Cas9システムに着目し、マダニの感染防御に関わる遺伝子ノックアウト技術の確立を試み、これらを用いた感染症モデルを作製することを本研究の主要目的とする。
[今まで得られた研究実績]マダニのウイルス感染防御に関わる遺伝子を同定するために、ウイルス感染防御に関わることが予想されるディフェンシン、スカベンジャーレセプター遺伝子を標的として、これらの遺伝子をノックダウン後、ウイルス感染実験を行った。これらのマダニにランガットウイルスを肛門接種によって感染させた後、マダニの生存率やマダニのウイルス感染量を調べることによって、ディフェンシン、スカベンジャーレセプター遺伝子の感染防御の役割について検討したが、マダニの生存率やウイルス感染量はノックダウン未処置群と比べて、大きな差は認められなかった。次に、遺伝子操作系を確立する上で必要となる、マダニ細胞内で外来遺伝子を高発現する遺伝子発現ベクターの探索並びに構築した。その結果、マダニアクチン遺伝子の推定プロモーター配列に置換した発現ベクターは、マダニ遺伝子操作系の確立において、遺伝子高発現ベクターとして使用できることが分かった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
マダニのウイルス感染防御に関わる分子は同定できていないが、マダニ細胞を用いた遺伝子ノックダウン、遺伝子導入の実験系を確立することができた。これらの研究成果は論文に公表されている。
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| Strategy for Future Research Activity |
研究代表者はCRISPR/Cas9システムを用いて、マダニ細胞やマダニを用いて遺伝子ノックアウト技術の確立を行う。ノックアウト技術が確立できたら、引き続きノックイン技術の確立をめざしていく。
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| Causes of Carryover |
（理由）
平成29年度は当初予定していた研究計画を行ったが、物品の購入が滞ってしまった。しかし、平成30年度は研究が計画通り円滑に進むことが予想される。
（使用計画）
平成30年度の予算使用計画は分子生物学用消耗品が主であり、その他、研究打ち合わせ・研究成果発表のための旅費、人件費・謝金、論文投稿料として使用するつもりである。
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Research Products
(11 results)
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[Journal Article] Transcriptional activities of two newly identified Haemaphysalis longicornis tick-derived promoter regions in the Ixodes scapularis tick cell line (ISE6)2018
Author(s)
Kusakisako, K., Ido, A., Masatani, T., Morokuma, H., Hernandez, E. P., Talactac, M. R., Yoshii, K. and Tanaka, T.
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Journal Title
Insect Mol. Biol.
Volume: In press
Pages: In press
Peer Reviewed / Int'l Joint Research
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[Journal Article] Synchronous Langat virus infection of Haemaphysalis longicornis using anal pore microinjection2017
Author(s)
Talactac, M. R., Yoshii, K., Hernandez, E. P., Kusakisako, K., Galay, R. L., Fujisaki, K., Mochizuki, M. and Tanaka, T.
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Journal Title
Viruses
Volume: 9（7）
Pages: 189
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
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[Presentation] Characterization and antiviral activity of a newly identified defensin-like peptide, HEdefensin, in the hard tick Haemaphysalis longicornis2017
Author(s)
Melbourne Talactac, 屋田友里花, 好井健太朗, Emmauel Hernandez, 草木迫浩大, 藤崎幸蔵, 望月雅美, Kozo Fujisaki, Masami Mochizuki, 田仲哲也
Organizer
第160回日本獣医学会学術集会
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