2019 Fiscal Year Annual Research Report
Structure determination of GPCRs using CryoEM.
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17K19349
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
島村 達郎 京都大学, 医学研究科, 特定講師 (90391979)
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| Project Period (FY) |
2017-06-30 – 2020-03-31
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| Keywords | GPCR |
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| Outline of Annual Research Achievements |
Gタンパク質共役型受容体(GPCR)は、細胞外のシグナルを細胞内へ伝える役割を担い、生命維持に必須な機能のほぼ全てに関与している。そのためGPCRは、 様々 な病気の治療薬の標的となっている。最近の創薬シーズ探索では、標的タンパク質の立体構造に基づく計算機を利用した薬物設計が利用されるようになり、 GPCRの構造情報の取得は喫緊の課題となっている。GPCRは分子量が50kDa程度と小さいため、これまではX線結晶構造解析により構造決定されてきたが、大量発現が難しい点や、構造上の柔軟性のため不安定な点などが原因で、X線結晶構造解析に必要な結晶化が難しい。一方で、この数年の劇的な技術進歩により、電子顕微鏡で構造解析できるタンパク質の分子量が100kDa程度まで低分子量化し、また、分解能も向上した。そこで本研究計画では、GPCRに抗体を結合させること で分子量を大きくし、電子顕微鏡により構造解析を行うことを目的とした。本年度は、受容体と抗体の複合体を作製し、電子顕微鏡を使ってデータを測定した。水冷サーバーを使用してデータを解析したところ、抗体が外れてしまっていることが判明した。一方で、抗体は、受容体の結晶化には役立ち、複合体のX線結晶構造解析を行ったところ、抗体は受容体にしっかりと結合していることが分かった。このことから、電子顕微鏡用のサンプル調整の過程で抗体が外れてしまっていると考えられたので、現在は使用する界面活性剤などの条件検討を行っている。
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Research Products
(4 results)
