2019 Fiscal Year Annual Research Report
Identification and function of endogenous retrovirus derived genes that mediate cell fusion
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17K19359
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| Research Institution | Tokai University |
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Principal Investigator |
上田 真保子 東海大学, 医学部, 奨励研究員 (60760353)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
三橋 里美 横浜市立大学, 医学部, 助教 (40466222)
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| Project Period (FY) |
2017-06-30 – 2020-03-31
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| Keywords | レトロトランスポゾン / ERV / 新規遺伝子 / 細胞融合 / 細胞融合 / 筋細胞 / 系統特異性 / RNA-seq解析 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
分化時の筋細胞や破骨細胞の細胞融合に直接かかわる遺伝子を同定するため、昨年度までに細胞融合にかかわる可能性のある、新規レトロトランスポゾン（ERV）由来の遺伝子候補を２つ特定していた。本年度は、さらに新しく加えた候補を構造解析により絞り込み、発現局在を確認するとともに、最終的に選出された候補配列の機能解析実験を行った。まず、新しい候補配列の詳細な構造解析を行った。具体的には十分なORFの長さがあり、融合ドメインや膜貫通領域があるかどうかを調べ、また新しく構築した立体構造から機能を持ちそうな配列を選出した。これらの解析で選ばれた新しい候補を加えた、全６配列の候補配列を最終的に得ることができた。これらの候補配列にたいし、１）qPCRおよびクローニングによる融合が盛んな時期の発現パターン、２）FLAGタグをもちいた遺伝子導入・免疫染色による膜への発現の可否、３）発現自体の強さ、により候補配列の優先順位を決定し、トップ２つの候補配列の機能解析（siRNAノックダウン解析・強制発現による融合活性の評価）を実施した。マウス筋細胞で候補配列をノックダウンし、筋細胞分化マーカーをコントロールと比較すると、筋管細胞の減少および細胞の未分化度の上昇が確認された。また候補配列の強制発現をマウス筋細胞で行うと、融合し多核になる細胞がコントロールに比べ多くなることが観察された。以上から、これらの候補配列は細胞融合に関与する可能性が高いと考えている。破骨細胞の候補の解析はやや遅れ気味だが、最終的な機能の確認を行っているところである
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Research Products
(5 results)
