2018 Fiscal Year Annual Research Report
Exploration of extracellular vesicles with long blood retention time and evaluateion of its physiological function
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17K19390
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
高橋 有己 京都大学, 薬学研究科, 准教授 (00547870)
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2017-06-30 – 2019-03-31
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| Keywords | 細胞由来小胞 / エキソソーム / ルシフェラーゼ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
細胞が分泌する細胞外小胞（extracellular vesicle; EV）は、その産生細胞に由来するタンパク質・核酸・脂質等の分子を内包している。EVが内包するmicro RNA（miRNA）がその取込み細胞に送達されることが明らかとされて以降、その生理機能の解明を目的とした検討が行われ、EVが介する細胞間情報伝達が癌の転移・浸潤、免疫応答や炎症反応、アルツハイマー病などさまざまな局面において重要な役割を果たしうる可能性が示されている。
本研究では、血中での滞留性を評価項目として高い血中滞留性を示すEVの画分の探索・同定を行う。さらに、同定した高い血中滞留性を示すEVについて、その構成物・内包物を明らかとするとともに、その体内動態と細胞に与える影響を評価することでその機能の解明を目指す。
本年度は、申請者がこれまでに開発した発光性レポータータンパク質、Gaussiaルシフェラーゼとホスファチジルセリン親和性タンパク質Lactadherinの融合タンパク質gLuc-LAを利用したEV標識法を用いて、血中滞留性の高いEV画分の探索を行った。種々の方法で、細胞の培養上清を回収し、密度、サイズ、分子量を指標に分画し、各フラクションを回収し、ルシフェラーゼ活性を指標に各画分に含まれるEVを評価した。また、回収した核EV画分を、マウスに静脈内投与した後、血中ルシフェラーゼ活性を経時的に測定することでその血中濃度推移を解析し、各EV画分の血中滞留性を評価した。その結果、従来のエキソソームと比較して数十倍程度の高い血中滞留性を示すEV画分の回収に成功した。回収した粒子について、その形態を電子顕微鏡にて観察したところ、粒子径20nmと比較的小さい粒子であることを明らかとした。
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