2018 Fiscal Year Research-status Report
慢性関節リウマチの病態生理における分泌小胞としてのエクソソームの役割
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17K19405
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| Research Institution | Iwate Medical University |
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Principal Investigator |
奈良場 博昭 岩手医科大学, 薬学部, 教授 (90296517)
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| Project Period (FY) |
2017-06-30 – 2020-03-31
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| Keywords | エクソソーム |
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| Outline of Annual Research Achievements |
近年、エクソソーム研究は大きく拡大し、その存在と意義に関して知見が集まりつつある。特に、エクソソーム中に含まれるmicroRNAの役割とその病態（特に癌）への関与は注目を集めている。しかし、神経性や腫瘍性疾患など、エクソソームの病態での役割の解析が進んでいるものは限られており、病態生理における全体像の理解は不十分と考えられる。我々は、エクソソームの炎症性疾患における役割を明らかにすることを目的とし、これまでに培養マクロファージのエクソソームにおいてiPLA2、COX-2、PGE合成酵素の存在を確認している。
本年度は、昨年度に実施した慢性関節リウマチモデルマウスの血中エクソソーム内microRNAのアレイ解析から、絞り込んだ30種類ほどのmicroRNAに関して、定量的PCRによる検出を行った。その結果、炎症性病態と発現量の変動が相関する数種類のmicroRNAを見いだした。また、モデルマウスから採取した滑膜細胞を培養し、エクソソームの放出を確認し、これに内在するmicroRNAの解析も実施した。これらの中には血中エクソソームにおいて見いだされたmicroRNAと共通するものも認められた。更に、これらのmicroRNAの標的遺伝子をデータベースより検索したところ、細胞接着因子や細胞増殖因子などに関わる生体分子が候補として高い確率を示した。
今後は、疾患関連リウマチ治療薬をもちいた、病態のコントロールとエクソソーム内在microRNAの変動に関しても解析を行う予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
疾患に関連するmicroRNAの候補を見いだしており、また、血中エクソソームと滑膜細胞由来のエクソソームにおけるmicroRNAの発現の差異に関しても研究が進展してきた。これらの治験をもとに、病態のコントロールとの関連から、研究を進展することが可能と考えられ、研究は概ね順調に進展していると判断出来る。
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| Strategy for Future Research Activity |
見いだされたmicroRNAに関して、炎症性病態との関係を明らかにする。更にそのmicroRNAが標的とする遺伝子が、関節リウマチにどのように関わっているのかを解明する。生体或いは培養細胞から単離したエクソソームを蛍光標識し、生体（実験動物）に局所投与した場合の生体内動態をライブイメージングで解析する。また、その動態に対して、局所炎症等が与える影響や抗炎症薬による変化も観察する。これらの解析から、関節リウマチモデル（SKGマウス）における病状や抗炎症薬等の治療による治癒効果をスコア化し、それに対するエクソソーム中のプロスタグランジン関連酵素群の量的及び質的変化を比較検討し、エクソソームのバイオマーカーとしての可能性を考察する。更に、疾患関連リウマチ治療薬を用いた病態のコントロールとエクソソーム含有microRNAの関係性に関しても検討を進める。
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| Causes of Carryover |
使用予定であった実験動物の数が、実験の誤差が想定より少なく削減が可能であった。今後は、ストックしたサンプルからの定量的な解析が多くなり、実験操作の繰り返しが必要であることから、人件費の支出を増やして、効率的な解析を実施する予定である。
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