2018 Fiscal Year Annual Research Report
Novel Phospholipid Analogs for NMR Structural Determination of Membrane Proteins
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17K19485
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Research Institution | Kyoto University |
Principal Investigator |
松崎 勝巳 京都大学, 薬学研究科, 教授 (00201773)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
矢野 義明 京都大学, 薬学研究科, 講師 (60402799)
星野 大 京都大学, 薬学研究科, 准教授 (70304053)
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Project Period (FY) |
2017-06-30 – 2019-03-31
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Keywords | 膜タンパク質 |
Outline of Annual Research Achievements |
膜中でフレキシブルで動的な構造変化を起こしていると考えられる膜タンパク質の動的構造を捉えるには、結晶中ではなく膜環境での測定が必須である。溶液NMRは構造変化ダイナミクスの高分解能測定が可能な手法であるが、立体構造が決定可能な分子量は最大で80 kDa程度に制限される。膜タンパク質NMR測定にブレークスルーをもたらすには、生体膜を構成するグリセロリン脂質の部分構造を持ち、かつ高分解能NMRに適した小さいサイズの膜タンパク質ー脂質複合体を形成するような新規可溶化剤が切望される。これまでに、脂質二分子膜と似た配向で膜タンパク質周囲を覆い可溶化できるようなデザインを持つリン脂質ベースの可溶化剤Cholyl-PCが、7回膜貫通(7TM)型タンパク質であるバクテリオロドプシン(27 kDa)を60 kDa程度の可溶化体として安定に可溶化でき、50°Cで少なくとも1週間程度ネイティブ構造を保持可能なことを見出している。しかし高濃度のCholyl-PC溶液は粘度が高く、可溶化したバクテリオロドプシンのNMRシグナル強度が十分に得られない問題点があることが明らかになった。そこで、可溶化体間の反発によって粘度上昇を防止する目的で、コール酸部分を硫酸化した新規Cholyl-PC誘導体を合成し可溶化剤としての性質を検討した。Choryl-PCで可溶化した膜タンパク質(バクテリオロドプシン)に、二硫酸化体(Cholyl-PC-di-sulf)を混合することにより、高濃度でも可溶化体のサイズが大幅に減少すること、熱安定性も高い(40°C、10日間)ことが明らかになり、高分解能NMRによる構造解析が十分に可能であると考えられる。
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