2019 Fiscal Year Annual Research Report
Development of single cell-based technologies for iPSC-neurons from patients with schizophrenia
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17K19488
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
橋本 均 大阪大学, 薬学研究科, 教授 (30240849)
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2017-06-30 – 2020-03-31
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| Keywords | iPS細胞 / 統合失調症 / 単細胞解析 / 患者神経細胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、様々な細胞種が混在しているヒトiPS由来の分化ニューロンから、興奮性や様々な種類の抑制性神経細胞を、細胞種特異的に蛍光タンパク質Venusを発現するレンチウイルスを用いて、ライブマーキングするシステムを構築することを目的としている。本年度は、iPS細胞の神経細胞への分化時におけるクローン間の性状の違いを解決するための分化技術の開発を実施するとともに、様々な細胞種特異的なマーカータンパク質をコードする遺伝子のプロモーター領域と蛍光タンパク質Venusを用いることにより、細胞種特異的にVenusを発現することを可能にすると期待される組み換えレンチウイルスを用いて、iPS分化神経細胞の細胞種特異的分取を実施し、以下の結果を得た。
1）抑制性神経細胞のマーキングシステムの改良のために、転写因子を過剰発現する分化方法を昨年度に導入しており、この方法では全細胞のうちおよそ30%程度が抑制性の神経細胞であることが明らかになっていたが、分化度が低い傾向にあること、およびクローン間における分化度に違いがあることが明らかになっていた。本年度は、GABA関連の転写因子を過剰発現する方法や培地にアストロサイトのconditioned mediumを添加する等といった改良を実施し、iPS細胞由来の分化度が高い抑制性神経細胞の培養に成功した。
2）抑制性神経細胞を特異的にマーキングすることを目的として、転写因子DLX5をコードする遺伝子のプロモーター領域により発現を支配されるVenusを発現する組み換えレンチウイルスをヒトiPS細胞由来の分化神経細胞に感染させた。Venus陽性細胞を単一細胞レベルで分取し、RT-PCRにより各種神経細胞マーカーの発現を調べたところ、DLX5-Venusウイルスによりsomatostatin陽性神経細胞が特異的にマーキングされることが明らかになった。
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[Journal Article] Autism-associated protein kinase D2 regulates embryonic cortical neuron development2019
Author(s)
Matsumura Kensuke、Baba Masayuki、Nagayasu Kazuki、Yamamoto Kana、Kondo Momoka、Kitagawa Kohei、Takemoto Tomoya、Seiriki Kaoru、Kasai Atsushi、Ago Yukio、Hayata-Takano Atsuko、Shintani Norihito、Kuriu Toshihiko、Iguchi Tokuichi、Sato Makoto、Takuma Kazuhiro、Hashimoto Ryota、Hashimoto Hitoshi、Nakazawa Takanobu
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Journal Title
Biochemical and Biophysical Research Communications
Volume: 519
Pages: 626～632
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Presentation] ３ｑ２９欠失症候群モデルマウスにおける精神疾患様の行動異常と大脳皮質神経細胞の過活動2020
Author(s)
Masayuki Baba, Kazumasa Yokoyama, Kaoru Seiriki, Kensuke Matsumura, Momoka Kondo, Kana Yamamoto, Atsushi Kasai, Yukio Ago, Kazuki Nagayasu, Atsuko Hayata-Takano, Shun Yamaguchi, Daisuke Mori, Norio Ozaki, Tadashi Yamamoto, Kazuhiro Takuma, Ryota Hashimoto, Hitoshi Hashimoto and Takanobu Nakazawa
Organizer
第93回日本薬理学会年会
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[Presentation] 前障の興奮性神経細胞はカテコラミンの放出を介して不安様行動を制御する2019
Author(s)
Misaki Niu, Atsushi Kasai, Hisato Igarashi, Wataru Tanabe, Takahiro Kuwaki, Masato Tanuma, Kaoru Seiriki, Yukio Ago, Takanobu Nakazawa, Akihiro Yamanaka, Hitoshi Hashimoto
Organizer
Neuro2019 (第42回日本神経科学学会・ 第62回日本神経化学会大会合同大会)
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