2019 Fiscal Year Annual Research Report
Next generation genome editing without artificial nucleases
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17K19491
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| Research Institution | Hiroshima University |
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Principal Investigator |
紙谷 浩之 広島大学, 医系科学研究科(薬), 教授 (10204629)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
鈴木 哲矢 広島大学, 医系科学研究科(薬), 助教 (20573950)
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| Project Period (FY) |
2017-06-30 – 2020-03-31
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| Keywords | ゲノム編集 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
Tailed duplex の改良：昨年度の研究により、tailed duplex の長鎖一本鎖の鎖長を色々と変えてアッセイしたところ、従来用いてきた鎖長よりも短い鎖長の場合に高い編集効率が観察される傾向にあった。令和元年度では、カイアシ由来 GFP（copGFP）遺伝子を有するプラスミドを用いたアッセイにより、長鎖一本鎖の鎖長、センス鎖とアンチセンス鎖の違い、標的部位との位置関係を詳細に調べた。その結果、従来に用いてきた数百塩基の鎖長の長鎖一本鎖より100 塩基程度の長鎖一本鎖を用いた場合の方が編集効率が高くなる場合があることを見出した。また、センス鎖とアンチセンス鎖を比較すると、アンチセンス鎖の方が編集効率が高いことを見出した。さらに、二本鎖部分と一本鎖部分のジャンクションの位置が編集の標的部位に近いほど編集効率が高い傾向が見出された。これらの結果は、従来の tailed duplex を用いた研究で得られた結果とは異なる新規な情報を含んでおり、さらなるtailed duplex の改良が可能であることを示している。
ss DNA と tailed duplex の比較：以前に、長鎖一本鎖 DNA（ss DNA）よりも tailed duplex の編集効率が高いことを報告してきた（Hyg-EGFP 遺伝子と rpsL 遺伝子）。今回、lacZα 遺伝子を標的として用いて、両者の編集能を比較したところ、両者に差は観察されなかった。また、上記の copGFP 遺伝子を用いた場合、多くの場合においては、tailed duplex による編集効率がss DNA による編集効率よりも高かったが、鎖長によっては逆転する場合もあった。従って、今後は標的遺伝子・標的部位毎に、ss DNA と tailed duplex の編集効率を比較する必要がある。
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Research Products
(7 results)
