2017 Fiscal Year Research-status Report
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17K19497
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| Research Institution | Kumamoto University |
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Principal Investigator |
塚本 佐知子 熊本大学, 大学院生命科学研究部(薬), 教授 (40192190)
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| Project Period (FY) |
2017-06-30 – 2019-03-31
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| Keywords | p53 / 天然資源 / 探索 / Nrf2 / がん抑制効果 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
2016年にWalerychらは、変異型p53の機能獲得としてNrf2を介したプロテアソームの転写活性化について報告した。これは、野生型p53では起きない現象である。そこで彼らは、変異型p53を野生型に変換させることにより、がん抑制効果が期待できると考え、「変異型p53を野生型に変換させる化合物」を作用させることにより、プロテアソームの転写活性化が消失することを示した。
変異型p53の機能を野生型へ転換させる化合物は、がん細胞選択的に増殖抑制作用を示すと考えられる。そのような変異型p53の機能を修飾し野生型へと転換させる天然資源由来の化合物を探索するために、蛍光免疫染色法によって細胞内のp53の表現型を検出する評価系の構築を行った。使用する細胞としてp53変異型のSKBR-3乳腺がん細胞を用いた。また、変異型p53を野生型に転換する作用が報告されているフェネチルイソチオシアネート（PEITC）をポジティブコントロールとして用いた。化合物処理群およびコントロール群に対して野生型p53を特異的に認識するマウス由来モノクローナル抗体あるいは変異型p53を特異的に認識するマウス由来モノクローナル抗体を一次抗体として各細胞に処理し、蛍光標識二次抗体で免疫染色を行い蛍光顕微鏡で観察した。条件検討した結果、コントロール群では変異型p53の蛍光免疫染色に成功したが、PEITC処理群では細胞障害が惹起され免疫染色効率が低下した。現在、化合物処理濃度の検討や蛍光免疫染色の条件検討を行っている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
現在、変異型p53を野生型に転換することを評価するアッセイ系の構築を行っているが、化合物処理濃度の検討や蛍光免疫染色の条件検討を重ねることにより、間もなくスクリーニングを開始できる見込みである。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後は蛍光免疫染色の条件を最適化し、マルチウェルプレートでSKBR-3細胞におけるp53の表現型を評価可能なアッセイ系を構築する。また、構築したアッセイ系を用いて天然資源のスクリーニングを行い、p53の表現型を転換する天然物の探索を行う。
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| Causes of Carryover |
次年度使用額が生じた理由は、アッセイ系の構築の遅れのためスクリーニングが開始できなかったためである。そこで、次年度にスクリーニングを行うために使用する予定である。
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