2018 Fiscal Year Research-status Report
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17K19647
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| Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
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Principal Investigator |
朝比奈 靖浩 東京医科歯科大学, 大学院医歯学総合研究科, 寄附講座教授 (00422692)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
柿沼 晴 東京医科歯科大学, 大学院医歯学総合研究科, 寄附講座准教授 (30372444)
中川 美奈 東京医科歯科大学, 統合教育機構, 准教授 (30401342)
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| Project Period (FY) |
2017-06-30 – 2020-03-31
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| Keywords | ヒトiPS細胞 / 発癌モデル / 肝星細胞 / HBV integration |
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| Outline of Annual Research Achievements |
これまで申請者らは肝細胞癌のゲノム変異プロファイルを次世代シークエンサーを用いて網羅的に解析し、肝発癌リスク因子とともに病因・予後との関連を解明してきた(Hepatology 2010, 2013, 2014, J Gastroenterol 2016)。本研究では、ヒトiPS細胞由来肝細胞系譜に最新ゲノム情報に基づく遺伝子改変を順次加えることで人工的肝発癌モデルを開発し、肝発癌機序の詳細を解明することを目的としている。これまで、ヒトiPS細胞から肝細胞系譜への分化誘導法を改良し、肝幹細胞マーカーでFACS分離を繰り返すことで、未分化細胞の混入のないヒトiPS細胞由来肝幹・前駆細胞の純化・培養法を確立した。また発生過程を模倣する分化誘導法を開発し、ヒトiPS細胞から中胚葉系細胞、さらには肝星細胞様細胞への分化誘導法を開発し、得られた細胞は脂肪滴を含有するなど肝星細胞としての形質を有していた。このヒトiPS細胞由来星細胞様細胞と肝細胞系譜細胞との共培養系を構築し、肝細胞系譜細胞のさらなる成熟化と、それには星細胞におけるラミニン等の遺伝子発現プロファイルの変化が関与することが示唆された。これと並行して、次世代シークエンサーを用いて肝腫瘍のゲノム変異およびウイルスゲノムの宿主ゲノムへのintegrationを網羅的に解析し、発癌過程に重要なゲノム異常とHBV-宿主キメラDNAを探索した。この情報をもとに、ヒトiPS細胞にHBV遺伝子挿入を加えるためのベクターの構築を進め、人工発癌モデル作成に必要な遺伝子候補における遺伝子改変を推進している。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
人工発癌モデル作成に関わる解析可能なヒトiPS細胞由来肝細胞系譜を樹立する必要があったため、これまでの分化・培養法の改良を行い、間葉系細胞への分化誘導法を確立した。これらの共培養系を構築することにより、より生体に近い培養モデルにおける解析が可能となった。また、臨床検体における遺伝子情報を基盤として、ヒトiPS細胞における改変遺伝子および導入遺伝子を進めた。
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| Strategy for Future Research Activity |
肝癌組織における網羅的ゲノム解析の結果、HBV‐ヒトキメラ遺伝子情報が明らかとなってきたため、ヒト－ウイルス遺伝子のbreak pointにHBV遺伝子を挿入した遺伝子改変iPS細胞を樹立することで、HBV integration発癌モデルを構築し、腫瘍性に関わる表現型および幹細胞機能に与える影響を解析し、非HBV起因性肝癌と本質的に病態を異にするHBV肝癌に特異的な発癌メカニズムの詳細を明らかとする予定である。
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| Causes of Carryover |
理由： 試薬等が計画当初より廉価で購入可能であったため。
使用計画：検討する数・種類を拡大して解析を行うため、試薬を増量して購入する予定である。
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Research Products
(30 results)
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[Journal Article] Loss of Fibrocystin Promotes Interleukin-8-Dependent Proliferation and CTGF Production of Biliary Epithelium.2019
Author(s)
Tsunoda T, Kakinuma S, Miyoshi M, Kamiya A, Kaneko S, Sato A, Tsuchiya J, Nitta S, Kawai-Kitahata F, Murakawa M, Itsui Y, Nakagawa M, Azuma S, Sogo T, Komatsu H, Mukouchi R, Inui A, Fujisawa T, Nakauchi H, Asahina Y, Watanabe M.
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Journal Title
Journal of Hepatology
Volume: 印刷中
Pages: 印刷中
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] The characteristic and the anti-HCV reagents susceptibility analysis of NS5A Resistance-Associated Substitutions (RAS) detected after DAA treatment failure patients.2018
Author(s)
Nitta S, Kato T, Tuchiya J, Inoue-Shinomiya E, Sato A, Tsunoda T, Miyoshi M, Kawai-Kitahata F, Murakawa M, Istui Y, Azuma S, Nakagawa M, Kakinuma S, Asahina Y.
Organizer
The 69th Annual Meeting of the American Association for the Study of Liver Disease (AASLD The Liver Meeting 2018)
Int'l Joint Research
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[Presentation] The in vitro analysis of NS5A resistance-associated substitutions (RAS) observed in DAA treatment failure patients.2018
Author(s)
Sayuri Nitta, Takanobu Kato, Jun Tuchiya, Emi Inoue-Shinomiya, Ayako Sato, Tomoyuki Tsunoda, Masato Miyoshi, Fukiko Kawai-Kitahata, Miyako Murakawa, Yasuhiro Istui, Seishin Azuma, Mina Nakagawa, Sei Kakinuma, Yasuhiro Asahina.
Organizer
25th International Symposium on Hepatitis C Virus and Related Viruses
Int'l Joint Research
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[Presentation] HBV Reactivation and changes in interferon-stimulated gene expression during treatment of direct-acting antivirals for HCV: analyses in a novel in vitro model for HBV-HCV coinfection using human induced pluripotent stem cell-derived hepatic cells.2018
Author(s)
Asahina Y, Kaneko S, Kakinuma S, Kamiya A, Miyoshi M, Tsunoda T, Inoue-Shinomiya E, Nitta S, Sato A, Asano Y, Nagata H, Kawai-Kitahata F, Murakawa M, Itsui Y, Nakagawa M, Azuma S, Watanabe M.
Organizer
The 53red annual meeting of the European association for the study of the liver (EASL The International Liver Congress 2018)
Int'l Joint Research
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[Presentation] Difference of gene mutational profile among viral- and non-viral HCC with or without prior HBV infection: Results of comprehensive deep sequencing analyses of cancer genes and HBV/AAV integration.2018
Author(s)
Kawai-Kitahata F, Asahina Y, Kakinuma S, Murakawa M, Nitta S, Nagata H, Kaneko S, Inoue E, Miyoshi M, Tsunoda T, Sato A, Nakagawa M, Itsui Y, Azuma S, Tanaka S, Tanabe M, Maekawa S, Enomoto N, Watanabe M.
Organizer
The 53red annual meeting of the European association for the study of the liver (EASL The International Liver Congress 2018)
Int'l Joint Research
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[Presentation] 日本人のジェノタイプ2型C型慢性肝炎患者に対するLDV/SOF療法．2018
Author(s)
朝比奈靖浩, 伊藤義人, 上野義之, 松崎靖司, 滝川康裕, 八橋弘, 玄田拓哉, 池田房雄, 松田卓磨, Huang K, Massetto Benedetta, Osinusi Anu, Brainard Diana, McHutchison John, 河田則文, 榎本信幸．
Organizer
第54回日本肝臓学会総会
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[Presentation] ヒトiPS細胞由来星細胞様細胞における転写因子LHX2の機能解析．2018
Author(s)
好正人, 柿沼晴, 金子俊, 紙谷聡英, 佐藤綾子, 角田知之, 四宮恵美, 北畑富貴子, 新田沙由梨, 村川美也子, 井津井康浩, 中川美奈, 東正新, 朝比奈靖浩, 渡辺守．
Organizer
第54回日本肝臓学会総会
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[Presentation] HCV NS5Aキメラ株感染培養系を用いたNS5A阻害剤に対する耐性変異と薬剤感受性評価システムの構築．2018
Author(s)
新田沙由梨, 朝比奈靖浩, 佐藤綾子, 三好正人, 角田知之, 永田紘子, 金子俊, 北畑富貴子, 村川美也子, 中川美奈, 東正新, 柿沼晴, 加藤孝宣, 渡辺守．
Organizer
第54回日本肝臓学会総会
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