2018 Fiscal Year Annual Research Report
Development of basic technology for intractable and rare diseases
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17K19665
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| Research Institution | Yokohama City University |
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Principal Investigator |
山下 暁朗 横浜市立大学, 医学部, 准教授 (20405020)
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| Project Period (FY) |
2017-06-30 – 2019-03-31
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| Keywords | NMD / 薬剤スクリーニングシステム / 嚢胞性線維症 / モデルマウス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究開発提案では、独自に樹立した高感度・高精度のmRNA 監視機構（Nonsense-mediated mRNA decay (NMD)）評価システムの改良を行い、新規化合物のスクリーニング・バリデーションを行う。同時に、得られたリード化合物による希少遺伝性疾患治療のin vitro レベルでのPOC(概念実証)を取得し、開発を加速させる。
平成30年度は１）平成29年度に作成した、HiBit(Split-NanoLucペプチド)にいくつかのアミノ酸コドンを含まないmutant-T4-Lysozyme (mT4L)を融合させたレポーター（Hibit-mT4L-wt/PTC）を用い、様々な細胞ストレス依存的なNMD活性の変化を解析した。その結果、これまで、ストレス依存的翻訳抑制によりNMDが抑制されていると考えられていたストレスにおいて、翻訳抑制非依存的にNMDが抑制されるということを発見した。また、Hibit systemにはDual luciferase kit が市販されていないが、プロトコールの改良により、これを可能とした。
２）NMD抑制による遺伝性疾患治療モデルとして、ColVIにナンセンス変異を有するUllrich 病患者由来細胞をHPV-E7/TERT高発現により不死化し、蛍光染色法により新規SMG1阻害剤依存的な変異ColVIタンパク質蓄積を証明した。さらに、動物モデルとして、嚢胞性線維症原因遺伝子であるmCFTRの変異のうち、ヒトで5番目に多い変異であるCFTR-W1282Xに相当するmCFTR-W1278X ノックインマウスをCRISPR-CAS9 systemにより作成した。mCFTR-W1278Xマウスは、mCFTRノックアウトマウスと同様、生後6~9週での致死であることが観察されたが、これについて、凍結受精卵の作成を行った。
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[Presentation] PI3 kinase様タンパク質リン酸化酵素SMG1による酸化ストレス応答制御：SMG1によるNRF2活性制御機構の解析2018
Author(s)
藤川 由美子, 山下 暁朗, 大貫 哲男, 鈴木 香絵, 青柳 杏子, 黒澤 瞳, 廣瀬 博子, 永井 陽子, 上村 博司, 吉田 稔, 髙橋 秀尚, 大野 茂男
Organizer
第41回日本分子生物学会年会
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