• Search Research Projects
  • Search Researchers
  • How to Use
  1. Back to project page

2017 Fiscal Year Research-status Report

Chemical cardiac reprogramming and mechanisms

Research Project

Project/Area Number 17K19678
Research InstitutionKeio University

Principal Investigator

家田 真樹  慶應義塾大学, 医学部, 講師 (70296557)

Project Period (FY) 2017-06-30 – 2019-03-31
Keywordsリプログラミング / 化合物
Outline of Annual Research Achievements

化合物ライブラリーを用いた心筋リプログラミング促進化合物のスクリーニングを行う。方法として心筋誘導化合物のスクリーニングは、心筋リプログラミング因子を同定した時に使用したMHC-GFPトランスジェニックマウス線維芽細胞を用いて行った。マウス線維芽細胞から心筋細胞誘導を促進する化合物を同定するため、連携研究者の東京医科歯科大学の清水重臣教授から供与される8400種類の化合物ライブラリーを用いて網羅的にスクリーニングした。具体的には心筋細胞のみGFPを発現するMHC-GFPトランスジェニックマウスの線維芽細胞にGata4/Mef2c/Tbx5を遺伝子導入して、翌日から無血清培地に化合物を添加し、心筋レポーターの発現をCell image analyzerで測定した。ヒットした化合物に関しては4週後に拍動心筋の数を計測して、機能的に成熟した心筋細胞の誘導を定量的に計測する。これまでの実験で8400化合物をスクリーニングし、6化合物で心筋リプログラミングが顕著に改善することを見出した。次にヒット化合物を用いて得られる誘導心筋細胞を分子生物学的および生理機能的に解析して、真に機能的な心筋細胞を誘導する化合物を選定した。これまでの実験で化合物を用いて誘導した心筋細胞で、様々な心筋特異的遺伝子の発現や横紋筋構造の形成をQRT-PCRや免疫染色で確認した。さらにその他の心筋蛋白の発現や心筋特異的蛋白の発現をFACSで定量的に解析した。心筋に特徴的な生理機能として細胞内カルシウム濃度の変化をRhod-3を用いて解析、活動電位の測定など詳細な生理機能の解析を行い、血清培地で誘導した心筋細胞と比較した。これまでに真に生理機能を有する心筋細胞の作製に成功している。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

心筋リプログラミング促進化合物のスクリーニングシステムの構築に成功した。さらにこれまでの実験で8400化合物をスクリーニングし、6化合物で心筋リプログラミングが顕著に改善することを見出した。

Strategy for Future Research Activity

今後は化合物による心筋リプログラミング促進の分子機構解明や臨床につながるヒト細胞での検討を行っていく。

Causes of Carryover

理由
心筋誘導化合物のスクリーニングで複数の新規心筋誘導化合物の同定に成功した。そのため、それぞれの機能を測定するため、来年度は新規心筋誘導化合物で作製した心筋細胞の遺伝子発現プロファイル、生理的機能の検討などを行う。
使用計画
心筋リプログラミングを促進する新規心筋誘導化合物を同定する検討を行った。その結果、複数の新規心筋誘導化合物を同定した。そのためこれら新規心筋誘導化合物が心筋リプログラミングに関与するか検討するため、マイクロアレイ解析や生理的機能解析を追加で行う。

  • Research Products

    (14 results)

All 2018 2017

All Journal Article (5 results) (of which Peer Reviewed: 5 results,  Open Access: 1 results) Presentation (5 results) (of which Int'l Joint Research: 5 results,  Invited: 5 results) Book (4 results)

  • [Journal Article] Direct In Vivo Reprogramming with Sendai Virus Vectors Improves Cardiac Function after Myocardial Infarction2018

    • Author(s)
      1.Miyamoto K, Akiyama M, Tamura F, Isomi M, Yamakawa H, Sadahiro T, Muraoka N, Kojima H, Haginiwa S, Kurotsu S, Tani H, Wang L, Qian L, Inoue M, Ide Y, Kurokawa J, Yamamoto T, Seki T, Aeba R, Yamagishi H, Fukuda K, Ieda M
    • Journal Title

      Cell Stem Cell.

      Volume: 22 Pages: 91~103.e5

    • DOI

      10.1016/j.stem.2017.11.010

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Distinct expression patterns of Flk1 and Flt1 in the coronary vascular system during development and after myocardial infarction2018

    • Author(s)
      Kurotsu Shota、Osakabe Rina、Isomi Mari、Tamura Fumiya、Sadahiro Taketaro、Muraoka Naoto、Kojima Hidenori、Haginiwa Sho、Tani Hidenori、Nara Kaori、Kubota Yoshiaki、Ema Masatsugu、Fukuda Keiichi、Suzuki Takeshi、Ieda Masaki
    • Journal Title

      Biochem Biophys Res Commun

      Volume: 495 Pages: 884~891

    • DOI

      10.1016/j.bbrc.2017.11.094

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Single-Construct Polycistronic Doxycycline-Inducible Vectors Improve Direct Cardiac Reprogramming and Can Be Used to Identify the Critical Timing of Transgene Expression2017

    • Author(s)
      Umei Tomohiko、Yamakawa Hiroyuki、Muraoka Naoto、Sadahiro Taketaro、Isomi Mari、Haginiwa Sho、Kojima Hidenori、Kurotsu Shota、Tamura Fumiya、Osakabe Rina、Tani Hidenori、Nara Kaori、Miyoshi Hiroyuki、Fukuda Keiichi、Ieda Masaki
    • Journal Title

      International Journal of Molecular Sciences

      Volume: 18 Pages: 1805~1805

    • DOI

      10.3390/ijms18081805

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Placental labyrinth formation in mice requires endothelial FLRT2/UNC5B signaling2017

    • Author(s)
      Tai-Nagara Ikue、Yoshikawa Yusuke、Numata Naoko、Ando Tomofumi、Okabe Keisuke、Sugiura Yuki、Ieda Masaki、Takakura Nobuyuki、Nakagawa Osamu、Zhou Bin、Okabayashi Koji、Suematsu Makoto、Kitagawa Yuko、Bastmeyer Martin、Sato Kohji、Klein R?diger、Navankasattusas Sutip、Li Dean Y.、Yamagishi Satoru、Kubota Yoshiaki
    • Journal Title

      Development

      Volume: 144 Pages: 2392~2401

    • DOI

      10.1242/dev.149757

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Direct Reprogramming, Epigenetics, and Cardiac Regeneration2017

    • Author(s)
      Kurotsu Shota、Suzuki Takeshi、Ieda Masaki
    • Journal Title

      J Card Fail.

      Volume: 23 Pages: 552~557

    • DOI

      10.1016/j.cardfail.2017.05.009

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Direct Cardiac Reprogramming and Heart Regeneration2017

    • Author(s)
      Masaki Ieda
    • Organizer
      Yonsei Stem cell and Cardiovascular Regeneration Symposium 2017
    • Int'l Joint Research / Invited
  • [Presentation] Mechano-transduction and Direct Cardiac Reprogramming for Heart Regeneration2017

    • Author(s)
      Masaki Ieda
    • Organizer
      International symposium on mechanobiology with its cutting edge and diversity
    • Int'l Joint Research / Invited
  • [Presentation] Direct Cardiac Reprogramming, Cell Fate Decision, and Heart Regeneration2017

    • Author(s)
      Masaki Ieda
    • Organizer
      The 27th Hot Spring Harbor International Symposium
    • Int'l Joint Research / Invited
  • [Presentation] Direct Reprogramming and Cardiac Regeneration2017

    • Author(s)
      Masaki Ieda
    • Organizer
      Cell Press Lab Links
    • Int'l Joint Research / Invited
  • [Presentation] Cardiac Reprogramming and Heart Regeneration via Mechano-Transduction2017

    • Author(s)
      Masaki Ieda
    • Organizer
      3rd International symposium on mechanobiology
    • Int'l Joint Research / Invited
  • [Book] メカニカルに注目した新しい心臓再生医療の可能性2017

    • Author(s)
      村岡直人、家田真樹
    • Total Pages
      p73-77
    • Publisher
      医薬ジャーナル
  • [Book] 心臓の発生・再生・創生2017

    • Author(s)
      谷英典、家田真樹
    • Total Pages
      p574-578
    • Publisher
      生体の科学
  • [Book] レジデント2017

    • Author(s)
      家田真樹
    • Total Pages
      p89-97
    • Publisher
      医学出版
  • [Book] 創薬・治療のターゲットとしての細胞分化2017

    • Author(s)
      刑部里奈、鈴木岳之、家田真樹
    • Total Pages
      p276-281
    • Publisher
      日薬理誌

URL: 

Published: 2018-12-17  

Information User Guide FAQ News Terms of Use Attribution of KAKENHI

Powered by NII kakenhi