iPS細胞技術を用いた新規腫瘍浸潤T細胞のTCR塩基配列決定

2017 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 17K19696
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: 直江 吉則 名古屋大学, 医学系研究科, 特任講師 (50392048)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 粕谷 英樹 名古屋大学, 医学系研究科, 教授 (00402636)
• Project Period (FY): 2017-06-30 – 2019-03-31
• Keywords: iPS / 細胞障害性T細胞 / 癌抗原

Outline of Annual Research Achievements

本研究の目的は腫瘍に浸潤した細胞障害性T細胞がどのようながん抗原を認識するT細胞レセプター(TCR)を有するか、TCRの配列決定、同定ならびに探索することを目的とする。TCRはa鎖とb鎖、あるいはg鎖とd鎖の二量体から構成され、前者の組み合わせからなるTCRをabTCR、後者の組み合わせからなるTCRをgdTCRと呼び、それぞれのTCRを持つT細胞はabT細胞、gdT細胞と呼ばれる。本研究においてabT細胞のa鎖とb鎖の塩基配列を決定する。a鎖は14番染色体、b鎖は7番染色体上に存在する。a鎖とb鎖の組み合わせにより、一つの抗原を認識することから、1細胞のT細胞のa鎖とb鎖の塩基配列を決定しなければならない。腫瘍に浸潤したT細胞は十分量単離することが可能であるが、T細胞を1細胞にクローニングしなければならない。理論上、FACS sortingにより1細胞にクローニングが可能であり、1細胞からa鎖とb鎖の塩基配列を決定することは可能であるが、1細胞から確実にDNAを抽出、塩基配列決定することは困難である。そこで、患者から得た貴重なT細胞から、確実にa鎖とb鎖の塩基配列を決定するために、単離したT細胞に山中因子を導入しiPS細胞化する。iPS細胞は無限増殖能を有することから、iPS細胞化したT細胞からコロニーをピックアップして容易にクローニングすることが可能となる。クローニングしたiPS細胞化したT細胞からa鎖とb鎖の塩基配列を決定する。iPS細胞化によりクローニングならびに塩基配列決定は非常に簡便化できる。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

マウス腫瘍に浸潤した細胞障害性T細胞に山中因子を導入することにより、iPS細胞を樹立することに成功した。また、健常人末梢血から得た細胞障害性T細胞に山中因子をHuman iPS Cell Generation All-in-One Vectorを用いてiPS細胞の樹立を試みたが、iPS細胞の樹立に成功したものの、得られたクローン数が著しく少なく、樹立効率はかなり低かった。

Strategy for Future Research Activity

本研究の最終的な目的は癌患者の腫瘍に浸潤した細胞障害性T細胞からiPS細胞の樹立を行い、TCRの配列決定である。しかしながら、現状ではiPS細胞樹立効率が低く、腫瘍に浸潤した細胞障害性T細胞からのiPS細胞樹立は困難と考えられる。そこで、山中因子の導入方法ならびにiPS細胞の培養条件の最適化を行い、iPS細胞の樹立効率の向上を試み、最終的に腫瘍に浸潤した細胞障害性T細胞からのiPS細胞の樹立を目指す。

Research Products

• [Journal Article] Genomic Signature of the Natural Oncolytic Herpes Simplex Virus HF10 and Its Therapeutic Role in Preclinical and Clinical Trials. (2017)
  • Author(s): Eissa IR, Naoe Y, Bustos-Villalobos I, Ichinose T, Tanaka M, Zhiwen W, Mukoyama N, Morimoto T, Miyajima N, Hitoki H, Sumigama S, Aleksic B, Kodera Y, Kasuya H.
  • Journal Title: Front Oncol Volume: 7 Pages: 147
  • DOI: 10.3389/fonc.2017.00149.
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Priming of lineage-specifying genes by Bcl11b is required for lineage choice in post-selection thymocytes. (2017)
  • Author(s): Kojo S, Tanaka H, Endo TA, Muroi S, Liu Y, Seo W, Tenno M, Kakugawa K, Naoe Y, Nair K, Moro K, Katsuragi Y, Kanai A, Inaba T, Egawa T, Venkatesh B, Minoda A, Kominami R, Taniuchi I.
  • Journal Title: Nat Commun. Volume: 8 Pages: 702
  • DOI: 10.1038/s41467-017-00768-1.
  • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
• [Presentation] ヒト膵癌異種移植モデルにおけるnab-Paclitaxel（nab-PTX）と腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスHF10 との併用療法 (2017)
  • Author(s): 森本 大士, 直江 吉則, 一ノ瀬 亨, Bustos Itzel, 神田 光郎, 丹羽 由紀子, 岩田 直樹, 林 真路, 小林 大介, 田中 千恵, 山田 豪, 中山 吾郎, 杉本 博行, 小池 聖彦, 藤原 道隆, 藤井 努, 田中 舞紀, 粕谷 英樹, 小寺 泰弘
  • Organizer: 第117 回日本外科学会定期学術集会
• [Presentation] ヒト大腸がんモデルにおけるセツキシマブとの併用による腫瘍溶解性ウイルスHF10 の抗腫瘍効果 (2017)
  • Author(s): 呉 智聞, 一ノ瀬 亨, 駱 晨虹, 直江 吉則, イッツェル・ブストス・ビジャロボス, 山田 豪, 藤井 努, 杉本 博行, 森本 大士, 向山 宣昭, 小寺 泰弘, 田中 舞紀, 粕谷 英樹
  • Organizer: 第117 回日本外科学会定期学術集会
• [Presentation] HF10 ウイルス療法におけるin situ vaccination効果についての検討 (2017)
  • Author(s): 粕谷 英樹, 直江 吉則, Bustos Itzel, 一ノ瀬 亨, 森本 大士, 向山 宣昭, 呉 智聞, 藤井 努, 小寺 泰弘, 田中 舞紀
  • Organizer: 第117 回日本外科学会定期学術集会
• [Presentation] Combination therapy of oncolytic herpes virus and anti-angiogenesis agent (bevacizumab) against human gastric cancer xenograft (2017)
  • Author(s): H. Kasuya, G. Tan, C. Luo, T. Ichinose, I. Bustos, Y. Naoe
  • Organizer: EACR-AACR-SIC Special Conference 2017
• [Presentation] Combination therapy of PD-L1 immune checkpoint inhibitor and oncolytic herpes simplex virus HF10 (2017)
  • Author(s): Mukoyama N, Naoe Y, Ichinose T, Nassr E. I. R, Luo C, Villalobos I. B, Zhiwen W, Miyajima N, Morimoto D, Tanaka M, Fujimoto Y, Sone M, Kodera Y, Kasuya H.
  • Organizer: 第23回日本遺伝子細胞治療学会学術集会
• [Presentation] Combination therapy against human pancreatic cancer with oncolytic herpes virus HF10 and abraxane (2017)
  • Author(s): Wu Z, Ichinose T, Luo C, Naoe Y, Villalobos I. B, Yamada S, Fujii T, Sugimoto H, Miyajima N, Morimoto D, Mukoyama N, Nishikawa Y, Koide U, Kuwahara T, Kodera Y, Tanaka M, Kasuya H.
  • Organizer: 第23回日本遺伝子細胞治療学会学術集会
• [Presentation] Systemic therapeutic potential of oncolytic herpes simplex virus HF10 adsorbed on antigen-specific lymphocytes (2017)
  • Author(s): Ichinose T, Naoe Y, Nassr E. I. R, Luo C, Villalobos I. B, Zhiwen W, Mukoyama N, Miyajima N, Morimoto D, Yamada S, Fujii T, Sugimoto H, Tanaka M, Kodera Y, Kasuya H.,
  • Organizer: 第23回日本遺伝子細胞治療学会学術集会
• [Presentation] Clinical trial data using HF10, oncolytic herpes simplex virus (2017)
  • Author(s): Kasuya H, Ichinose T, Naoe Y, Villalobos I. B, Nassr E. I. R, Luo C, Zhiwen W, Mukoyama N, Miyajima N, Morimoto D, Hirooka Y, Goto H, Tanaka M.
  • Organizer: 第23回日本遺伝子細胞治療学会学術集会
• [Presentation] COMBINATION THERAPY AGAINST HUMAN COLORECTAL CANCER WITH THE EPIDERMAL GROWTH FACTOR RECEPTOR INHIBITOR CETUXIMAB AND ONCOLYTIC HERPES SIMPLEX VIRUS HF10 (2017)
  • Author(s): 呉 智聞, 一ノ瀬 亨, 駱 晨虹, 直江 吉則, ヴィラロボス イッツェル・バストス, 山田 豪, 杉本 博行, 宮嶋 則行, 森本 大士, 向山 宣昭, 西川 洋子, 小出 悠介, 小寺 泰弘, 田中 舞紀, 粕谷 英樹
  • Organizer: 第55回日本癌治療学会学術集会
• [Presentation] Combination therapy of PD-L1 immune checkpoint inhibitor and oncolytic herpes simplex virus HF10 (2017)
  • Author(s): 森本 大士, 直江 吉則, 向山 宜明, 一ノ瀬 亨, Itzel Bustos Villalobos, 神田 光郎, 丹羽 由紀子, 岩田 直樹, 林 真路, 小林 大介, 田中 千恵, 中山 吾郎, 山田 豪, 杉本 博行, 小池 聖彦, 藤原 道隆, 田中 舞紀, 藤本 保志, 粕谷 英樹, 小寺 泰
  • Organizer: 第28回日本消化器癌発生学会総会
• [Presentation] 腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスHF10と免疫チェックポイント阻害剤の併用 (2017)
  • Author(s): 森本 大士, 直江 吉則, 向山 宜明, 宮嶋 則行, Ibrahim Ragab Eissa, 一ノ瀬 亨, Itzel Bustos-Villalobos, 山田 豪, 田中 舞紀, 藤本 保志, 小寺 泰弘, 粕谷 英樹
  • Organizer: 第51回制癌剤適応研究会
• [Book] 遺伝子医学MOOK 31号 がん免疫療法 - What's now and what's next? 第2章の4の3) 腫瘍溶解性ウイルスHF10による再発乳がん多発結節症例, 切除不能進行膵がん症例に対する臨床研究 (2017)
  • Author(s): 粕谷 英樹, 直江 吉則, 一ノ瀬 亨, 廣岡 芳樹, 後藤 秀実, 田中 舞紀
  • Total Pages: 294 (136-143)
  • Publisher: (株)メディカル ドゥ
• [Remarks] 名古屋大学大学院医学系研究科 癌免疫治療研究室
  • URL: https://www.med.nagoya-u.ac.jp/intlexch/cancerimmuno/www/index.html