2019 Fiscal Year Annual Research Report
Functional analysis of novel myokine
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17K19920
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| Research Institution | Tokyo Metropolitan University |
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Principal Investigator |
眞鍋 康子 首都大学東京, 人間健康科学研究科, 准教授 (60467412)
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| Project Period (FY) |
2017-06-30 – 2020-03-31
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| Keywords | 骨格筋 / マイオカイン |
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| Outline of Annual Research Achievements |
運動がもたらす多様な健康効果は、骨格筋から分泌されるマイオカインによってもたらされるという研究が進展している。しかし、これまでにマイオカインと報告されているものは、実際には「新規」ではない。それらは過去に骨格筋以外の臓器で分泌タンパク質として知られていたものが、骨格筋でも分泌されることが明らかになったものである。本研究では、次世代シーケンス法によるトランスクリプトーム解析から発見された新規マイオカイン（仮称#30020）が、骨格筋でペプチド・タンパク質に翻訳され、分泌され、生理的な役割を生じさせるかどうかを明らかにすることを目的としている。昨年度までに、ヒト骨格筋細胞で＃30020の遺伝子発現が確認されること、マウスなど他の動物種では発現していないことが明らかとなった。また、#30020をヒト骨格筋からクローニングし、実験ツールとして使うため、タグが付加されていないベクター、または、HA-tagを付加した発現ベクターを作製し、in vivo エレクトロポレーション法にてマウス下肢に強制発現させ、HA抗体を用いたウェスタンブロッティングすることで#30020が骨格筋でタンパク質として発現すること確認している。2019年度は、内因性の#30020を検出するため、抗体を作製し、ウェスタンブロッティング法や免疫染色法で発現の解析、ならびに分泌の検証を行った。
その結果、作製した抗体ではウェスタンブロッティング、免疫染色ともに特異的シグナルを得ることができなかった。発現量が少ない可能性や、抗体の力価が低い可能性も考えられたため、SDS-PAGEにより分離し目的の位置に現れるバンドを回収し、質量分析法をもちいて解析を試みた。しかし、いずれの方法においても検出することができなかった。また、強制発現させた細胞を用いても上清中への分泌は確認されなかった。
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[Journal Article] R3hdml regulates satellite cell proliferation and differentiation2019
Author(s)
Sakamoto K, Furuichi Y, Yamamoto M, Takahashi M, Akimoto Y, Ishikawa T, Shimizu T, Fujimoto M, Takada-Watanabe A, Hayashi A, Mita Y, Manabe Y, Fujii NL, Ishibashi R, Maezawa Y, Betsholtz C, Yokote K, Takemoto M.
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Journal Title
EMBO Rep
Volume: 20
Pages: e47957
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Presentation] Single-cell information analysis reveals small intracellular and large intercellular variations increase cellular information capacity2019
Author(s)
Takumi Wada, Mitsutaka Wataya, Masashi Fujii, Ken-ichi Hironaka, Miki Eto, Shinsuke Uda, Daisuke Hoshino, Katsuyuki Kunida, Haruki Inoue, Hiroyuki Kubota Hiroki, Hamaguchi, Yasuro Furuichi , Yasuko Manabe, Nobuharu L. Fujii, Shinya Kuroda
Organizer
The 20th International Conference on System Biology (ICSB2019I)
Int'l Joint Research
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