2020 Fiscal Year Annual Research Report
In vitro reconstitution of lipid countertransport
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17KT0015
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| Research Institution | Niigata University |
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Principal Investigator |
中津 史 新潟大学, 医歯学系, 准教授 (50360607)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
三間 穣治 大阪大学, 蛋白質研究所, 准教授 (30335301)
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| Project Period (FY) |
2017-07-18 – 2021-03-31
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| Keywords | 脂質交換輸送 / 構成的手法 / リポソーム |
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| Outline of Annual Research Achievements |
オキシステロール結合タンパク質ファミリーは、脂質輸送ドメインを介して疎水性である脂質の生体膜間輸送を担う脂質輸送タンパク質である。オキシステロール結合タンパク質ファミリーのORP5およびORP8は、イノシトールリン脂質PI4Pとホスファチジルセリンを交換輸送する活性を有することが我々の研究から判明している。細胞内において、ORP5およびORP8は、小胞体―細胞膜コンタクトに局在し、細胞膜からPI4Pを小胞体へ輸送するとともに、ホスファチジルセリンを小胞体から細胞膜へ交換輸送する。本研究では、これら脂質交換輸送タンパク質に着目し、脂質輸送を構成的手法によりin vitroで再構成することで、その定量的な理解を目指している。
脂質交換輸送アッセイを行うための精製タンパク質を得るために、まず、脂質輸送ドメインの長さの異なる数種類のコンストラクトを比較し、高純度精製タンパク質が得られる最適なコンストラクトを選択した。そして、大腸菌を用いた組換えタンパク質精製法を様々な条件で検討した。最終的には、低温（18˚C）かつ低濃度のタンパク質発現誘導条件で特定の界面活性剤を用いたときに高純度の精製タンパク質を得ることができた。これらの精製タンパク質を用いて、前年度までに樹立した脂質輸送アッセイを行い、脂質交換輸送活性を測定することに成功した。また、これまでに報告のないオキシステロール結合タンパク質ファミリー分子群による脂質交換輸送活性の測定を行い、イノシトールリン脂質PI4Pにより駆動する脂質交換輸送活性を示唆するデータを得た。
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