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2006 Fiscal Year Annual Research Report

脂質修飾にスポットライトをあてたG蛋白質と光シグナリングの解析

Research Project

Project/Area Number 18057007
Research InstitutionThe University of Tokyo

Principal Investigator

深田 吉孝  東京大学, 大学院理学系研究科, 教授 (80165258)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 小島 大輔  東京大学, 大学院理学系研究科, 助手 (60376530)
KeywordsG蛋白質 / 光受容体 / 網膜 / 桿体 / 脂質修飾 / 松果体 / 視覚 / 概日時計
Research Abstract

交付申請書に記載の研究実施計画に沿って研究を遂行し、下記の成果を得た。
1.GtγC71stopノックインマウスの作製:網膜光受容細胞のG蛋白質トランスデューシンの脂質修飾の役割を調べるため、イソプレニル化Cys残基を欠失したトランスデューシンγサブユニット(非修飾型Gtγ)を発現する組換えマウスを作製した。具体的にはまず、マウスGtγ遺伝子のCys71(ファルネシル化部位)の位置に終止コドンを挿入し、翻訳産物がイソプレニル化に必要なCAAXモチーフを持たない(つまり翻訳後修飾を受けない)非修飾型Gtγに改変した。次に、この改変Gtγ遺伝子(C71stop)をターゲッティングベクターに組み込み、ES細胞における相同組換えを行った。この組換えES細胞株を用いて、Gtγ-C71stopノックインマウス(C71stopマウス)を作製した。さらに、このC71stop変異のホモ接合体を作製して網膜抽出液の電気泳動解析を行なったところ、発現しているGtγはイソプレニル化修飾を受けていないことが確認された。
2.概日光需要蛋白質メラノプシン調製と光照射実験:メラノプシンーG_<11>経路の生化学的解析に向けて、HEK293細胞を用いた組換えメラノプシンの発現系を構築した。すなわち、ニワトリ松果体由来のメラノプシンcDNA(Opn44)を改変してHEK293に導入し、C末端に1D4タグを付加したOpn4-1蛋白質を強制発現した。この細胞に発色団11-cis-retinalを添加した後、界面活性剤を用いて蛋白質を抽出した。得られたOpn4-1試料の光照射実験を行ったところ、光感受性色素の生成が確認された。,一方、Opn4-1の重複遺伝子(Opn4-2)がニワトリ松果体において発現していることを見出した。さらに松果体由来のcDNAを詳細に解析したところ、Opn4-1およびOpn4-2それぞれに2種類のスプライスバリアント(LおよびS)が存在することが明らかになった。

  • Research Products

    (9 results)

All 2007 2006

All Journal Article (4 results) Book (5 results)

  • [Journal Article] A median third eye : Pineal gland retraces evolution of vertebrate photoreceptive organ.2007

    • Author(s)
      Hiroaki Mano
    • Journal Title

      Photochem. Photobiol. 83

      Pages: 11-18

  • [Journal Article] Phosphorylation of mCRY2 at Ser557 in the hypothalamic suprachiasmatic nucleus of the mouse.2006

    • Author(s)
      Nobuhiro Kurabayashi
    • Journal Title

      Chronobiology Int. 23

      Pages: 129-134

  • [Journal Article] Molecular cloning, mRNA expression, and immunocytochemical localization of a putative blue-light photoreceptor CRY4 in the chicken pineal gland.2006

    • Author(s)
      Yoko Kubo
    • Journal Title

      J. Neurochem. 97

      Pages: 1155-1165

  • [Journal Article] GRK1 and GRK7 : Unique cellular distribution and widely different activities of opsin phosphorylation in the zebrafish rods and cones.2006

    • Author(s)
      Yasutaka Wada
    • Journal Title

      J. Neurochem. 98

      Pages: 824-837

  • [Book] 分子細胞治療 特集『蛋白質修飾』の「脂質修飾 : タンパク質の機能制御因子」の項を分担執筆2007

    • Author(s)
      葛西 秀俊(分担執筆)
    • Total Pages
      89(8)
    • Publisher
      先端医学社
  • [Book] Biophilia 特集『眠りのサイエンス』の「生物はどのように時間を刻んでいるのだろうか?~生物時計~」の項を分担執筆2007

    • Author(s)
      深田 吉孝(分担執筆)
    • Total Pages
      78(4)
    • Publisher
      株式会社アドスリー
  • [Book] 細胞工学 特集『プロテオミクスの細胞機能解析への挑戦』の「質量分析法による翻訳後修飾の精密解析~光シグナル伝達系でのファルネシル化の役割~」の項を分担執筆2006

    • Author(s)
      葛西 秀俊(分担執筆)
    • Total Pages
      118(5)
    • Publisher
      秀潤社
  • [Book] 「Gタンパク質の選択的ファルネシル化による光シグナル伝達の制御」の項を分担執筆2006

    • Author(s)
      葛西 秀俊(分担執筆)
    • Total Pages
      91(5)
    • Publisher
      生化学
  • [Book] 特集『時間生物学』の「生物時計の生化学」の項を分担執筆2006

    • Author(s)
      深田 吉孝(分担執筆)
    • Total Pages
      66(6)
    • Publisher
      学術月報

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Published: 2008-05-08   Modified: 2016-04-21  

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