アメリカ大陸における疾患感受性を規定するウシ主要組織適合遺伝子の検出技術の実用化

2009 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 18255013
• Research Institution: The Institute of Physical and Chemical Research
• Principal Investigator: 間 陽子 The Institute of Physical and Chemical Research, 分子ウイルス学特別研究ユニット, ユニットリーダー (50182994)
• Keywords: ウシMHC(BoLA) / アメリカ大陸 / BoLAクラスII対立遺伝子 / PCR-SBT法 / 牛白血病 / 牛白血病ウイルス(BLV) / 疾患感受性 / 多型性

Research Abstract

申請者らは日本において牛白血病の発症に対して抵抗性と感受性を規定するウシMHC(BoLA)クラスIIアリルを発見した。本研究課題では、乳牛と肉牛の生産では世界の25%～40%を占めるアメリカ大陸の主要な畜産国を対象にして、疾患感受性を規定する規定するBoLAクラスIIアリルの分布状況をPCR-SBTを調査した。本年度は、チリにおいて、21牧場より942頭のウシ血液を採血し、DNAの収集を行った。採材したのは、Black Angus, Red Angus, Chilean Wagyu, Simmental, mixed Hereford, Black Holstein, Red Holstein, Jersey, Ovelo Colored, Ovelo Negro, pure Herefordの11品種である。回収したDNAを用いて、現在BoLA-DRB3アリルの同定とBLV感染率の解析を行ったところ、各アリルの頻度は、品種ごとに大きく異なることが明らかとなった。一方、既存のPCRによる牛白血病ウイルス(BLV)プロウイルスの検出を行ったところ、感度に問題があることが判明した。そこで、これらのサンプルを用いてBLVのPCRによる検出法を新たに構築した。この方法は、BLV-LTRを1回のPCRで増幅するため、従来からの課題であったコンタミネーションのリスクを大幅に軽減することができるとともに、感度も大幅に上昇させることに成功した。この方法を用いて、チリ・ボリビア・アルゼンチン・パラグアイ・ペルーおよびアメリカ合衆国のBLVの感染状況を調査し、BoLA-DRB3アリル頻度との相関性を明らかにした。一方、国内の感染牛を用いた解析により、BLVの病態が進行した個体のウイルスロードは高い傾向にあることが明らかとなった。このことは、病態進行に感受性の個体は、その個体自身の発症の危険が増大するだけでなく、感染拡大にも寄与することが予想される。このことから、発症感受性アリルの同定は世界レベルで非常に重要であることが明らかとなった。

Research Products

• [Journal Article] Molecular cloningand expression analysis of bovine programmed death-1 (2010)
  • Author(s): Ikebuchi R, Konnai S, Sunden Y, Onuma M, Ohashi K.
  • Journal Title: Microbiol.Immunol. (印刷中)
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] MHC class II DR classification based on antigen-binding groove natural selection (2009)
  • Author(s): Tajeshima S., Sarai N., Aida Y
  • Journal Title: Biochem.Biophys.Res.Commun. 385 Pages: 137-142
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Establishment of a polymerase chain reaction-sequence-based typing me-thodfor genotyping cattle major histocompatibility complex class II DRB3 (2009)
  • Author(s): Takeshima S., Matsumoto Y., Aida Y.
  • Journal Title: J.Dairy Sci. 92 Pages: 2965-2970
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Association of the amino acid motifs of BoLA-DRB3 alleles with mastitis pathogens in Japanese Holstein cows (2009)
  • Author(s): Yoshida T., Mukoyama H., Furuta H., Kondo Y., Takeshima S., Aida Y., Kosugiyama M., Tomogane H.
  • Journal Title: Ani.Sci.J. 80 Pages: 510-519
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Association of BoLA-DRB3 alleles identified by a sequence-based typing method with mastitis pathogens in Japanese Holstein cows (2009)
  • Author(s): Yoshida T., Mukoyama H., Furuta H., Kondo Y., Takeshima S., Aida Y., Kosugiyama M., Tomogane H.
  • Journal Title: Ani.Sci.J. 80 Pages: 498-509
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Development and application of a quantitative real-time PCR for thediagnosis of Surra in water buffaloes (2009)
  • Author(s): Konnai S, Mekata H, Mingala C.N., Abes N.S., Gutierrez C.A., Herrera R.V., Dargantes A.P., Witola W.H., Cruz L.C., Inoue N., Onuma M., Ohashi K
  • Journal Title: Infect.Genet.Evol. 9 Pages: 449-452
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Molecular detection of trypanosomes in cattle in South America and genetic diversity of Trypanosoma evansi based on expression-site-associated gene 6 (2009)
  • Author(s): Mekata H, Konnai S, Witola W.H., Inoue N., Onuma M., Ohashi K
  • Journal Title: Infect.Genet.Evol. 9 Pages: 1301-1305
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] PCR-based detection of blood parasites in cattle adult Rhipicephalus appendiculatus ticks (2009)
  • Author(s): Yamada, S., Konnai, S., Imamura, S., Simuunza, M., Chembensofu, M., Chota, A., Nambota, A., Onuma, M.Ohashi, K
  • Journal Title: Vet.J. 182 Pages: 352-355
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Quantitative analysis of cytokine mRNA expression and protozoan DNA load in Theileria parva-infected cattle.J (2009)
  • Author(s): Yamada, S., Konnai, S., Imamura, S., Simuunza, M., Chembensofu, M., Chota, A., Nambota, A., Onuma, M.Ohashi, K.
  • Journal Title: Vet.Med.Sci. 71 Pages: 49-54
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Classification of new BVDV isolates from Philippine water buffalo using the viral E2 region (2009)
  • Author(s): Mingala, C.N., Konnai S, Tajima, M., Onuma M., Ohashi, K.
  • Journal Title: J.Basic Microb. 49 Pages: 495-500
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Comparative moleculo-immunological analysis of swamp and riverine type water buffaloes responses (2009)
  • Author(s): Mingala, C.N., Konnai S, Cruz L.C., Onuma M., Ohashi, K
  • Journal Title: Cytokine 46 Pages: 273-282
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Quantification of water buffalo(Bubalus bubalis)cytokine expression in response to inactivated foot-and-mouth disease(FMD)vaccine (2009)
  • Author(s): Mingala, C.N., Konnai S, Venturina Fe A., Onuma M., Ohashi, K
  • Journal Title: Res.Vet.Sci 87 Pages: 213-217
  • Peer Reviewed
• [Presentation] 縮合プライマーを用いたリアルタイム定量PCR法による牛白血病プロウイルス量とウイルス力価及びBIV感染牛の病態進行との相関解析 (2010)
  • Author(s): 神馬繭子、竹嶋伸之輔、松本有生、宮坂卓、的場和弘、遠藤大二、間陽子
  • Organizer: 第149回日本獣医学会
  • Place of Presentation: 東京 武蔵野市 日本獣医生命科学大学(発表確定)
  • Year and Date: 20100326-20100328
• [Presentation] ウシ主要組織適合抗原(MHC)クラスII遺伝子のハプロタイプの解析 (2010)
  • Author(s): 宮坂卓、竹嶋伸之輔、松本有生、神馬繭子、松橋珠子、小林直彦、泉對博、間陽子
  • Organizer: 第149回日本獣医学会
  • Place of Presentation: 東京 武蔵野市 日本獣医生命科学大学(発表確定)
  • Year and Date: 20100326-20100328
• [Presentation] 牛白血病の世界における感染拡大の現状 (2010)
  • Author(s): 間陽子
  • Organizer: 第149回日本獣医学会
  • Place of Presentation: 東京 武蔵野市 日本獣医生命科学大学(発表確定)
  • Year and Date: 20100326-20100328
• [Presentation] MHC をマーカーにした牛白血病育種戦略 (2010)
  • Author(s): 間陽子
  • Organizer: 平成21年度日本獣医師会学会年次大会
  • Place of Presentation: 宮崎市 ワールドコンベンションセンター
  • Year and Date: 2010-01-29
• [Presentation] ホノスタイン種における牛白血病の病態調査と牛主要組織適合抗原(Bovine Leukocyte Antigen)遺伝子型別 (2010)
  • Author(s): 富田啓介、中条正樹、加茂前優花、日下部麻子、石井淳、塚本洋、柴折浩幸、浦本京也、松本有生、竹嶋伸之輔、間陽子
  • Organizer: 兵庫県家畜保健衛生業績発表会
  • Place of Presentation: 兵庫 神戸市
  • Year and Date: 2010-01-22
• [Presentation] 多様な牛白血病ウイルス(BLV)に適用可能な縮合プライマーを用いたBLV定量法の確立 (2009)
  • Author(s): 神馬繭子、竹嶋伸之輔、宮坂卓、松本有生、Araingaramirez Mariluz、的場和弘、遠藤大二、間陽子
  • Organizer: 第57回日本ウイルス学会学術集会
  • Place of Presentation: 東京 都市センターホテル
  • Year and Date: 20091025-20091027
• [Presentation] 環境生乳房炎に抵抗性を付与するウシ主要組織適合抗原クラスII (2009)
  • Author(s): 竹嶋伸之輔、松本有生、陳晶、吉田達行、向山明孝、間陽子
  • Organizer: 獣医臨床遺伝研究会・第18回年会
  • Place of Presentation: 山形 天童市 天童ホテル
  • Year and Date: 20091017-20091018
• [Presentation] ウシの種分化および品種形成におけるMHCクラスIIDQA1遺伝子の多様性解析 (2009)
  • Author(s): 竹嶋伸之輔、陳晶、三木晶未、加堂真由、間陽子
  • Organizer: 第18回日本組織適合性学会
  • Place of Presentation: 名古屋 名古屋国際会議場
  • Year and Date: 20090925-20090927
• [Presentation] 縮合プライマーを用いた牛白血病ウイルス(BLV)プロウイルス定量によるBLV感染牛の病態進行の解析 (2009)
  • Author(s): 神馬繭子、竹嶋伸之輔、松本有生、的場和弘、遠藤大二、間陽子
  • Organizer: 第2回HTLV-1研究会
  • Place of Presentation: 東京 東京大学医科学研究所
  • Year and Date: 20090829-20090830
• [Presentation] 反芻動物のMHCと疾患 (2009)
  • Author(s): 竹嶋伸之輔, 間陽子
  • Organizer: 第147回日本獣医学会学術集会
  • Place of Presentation: 宇都宮 栃木県総合文化センター
  • Year and Date: 20090402-20090404
• [Presentation] 牛白血病ウイルスロードとMHCクラスH遺伝子の相関性 (2009)
  • Author(s): 宮坂卓、竹嶋伸之輔、神馬繭子、松本有生、小林直彦、松橋珠子、泉封博、間陽子
  • Organizer: 第147回日本獣医学会学術集会
  • Place of Presentation: 宇都宮 栃木県総合文化センター
  • Year and Date: 20090402-20090404
• [Presentation] 牛白血病プロウイルス定量用縮合プライマーを用いたリアルタイム定量PCR法の構築とその応用 (2009)
  • Author(s): 神馬繭子、竹嶋伸之輔、遠藤大二、宮坂卓、的場和弘、間陽子
  • Organizer: 第147回日本獣医学会学術集会
  • Place of Presentation: 宇都宮 栃木県総合文化センター
  • Year and Date: 20090402-20090404
• [Presentation] 牛白血病ウイルス(BLV)ウイルスロードとMHCクラスII遺伝子の相関性 (2009)
  • Author(s): 宮坂卓、竹嶋伸之輔、神馬繭子、松本有生、小林直彦、松橋珠子、泉封博、間陽子
  • Organizer: 「人獣共通感染症の戦略的国際疫学研究の推進と若手研究者の実践的育成」平成21年度公開シンポジウム「感染症の戦略的国際疫学研究の最前線-日本を取りまく感染症の現状-」
  • Place of Presentation: 神奈川 藤沢市 日本大学生物資源科学部 大講堂
  • Year and Date: 2009-12-12
• [Presentation] REACION ENTRE BoLA(Antigenos Iinfocitarios Bovino)EINFECCION DE LEUCOSIS BOVINA (2009)
  • Author(s): 間陽子、竹嶋伸之輔
  • Organizer: CENTRO DE INSEMINACION ARTIFICIAL FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS UNIVERSIDAD AUSTRAL DE CHILE
  • Place of Presentation: チリバルディビア
  • Year and Date: 2009-11-27
• [Remarks]
  • URL: http:www.riken.jp/lab/virus/animalMHC.htm
• [Remarks]
  • URL: http://www.riken.jp/r-world/research/lab/spunit/viral/index.html