| Research Abstract |
GABAは,神経系における主要な抑制性伝達物質として神経の電位活動の制御に加えて,覚醒,睡眠,概日リズムや学習,運動,感覚情報処理など脳の機能を構築する上で中心的役割を果たしている。GABAは,グルタミン酸脱炭酸酵素(GAD;GAD65,GAD67の2型存在)によって合成される。本研究では,GAD遺伝子の誘導型ノックアウトマウスの作成を目指した。また,完全型ノックアウトマウスを用いて,胎児の腹壁形成と口蓋形成におけるGAD65,GAD67の役割について検討した。
GAD67遺伝子完全ノックアウトマウスは,出生日に死亡するので,アダルトでのGAD67の機能が不明である。従って,tetracycline-controlled transactivator(tTA)システムを利用した誘導型GAD67ノックアウトマウスの作成を目指した。誘導型GAD67ノックアウトマウスの作成には,GAD67遺伝子にtTA2をノックインしたマウス(GAD67-tTA2マウス)とtTA2が結合するtetプロモーターの下流にGAD67 cDNAを配置したトランスジェニックマウス(tet-GAD67マウス)の2種類の遺伝子改変マウスが必要である。GAD67-tTA2マウスは既に作成した。一方,tet-GAD67マウス作成に使用するコンストラクトを構築した。このコンストラクトを293-Tet-Off細胞に導入し,ウエスタン法を行い,テトラサイクリンシステムが機能することを培養細胞系で確認した。今後は,このコンストラクトを受精卵に導入することにより,tet-GAD67マウスを作成し,GAD67-tTA2マウスと交配することにより誘導型GAD67ノックアウトマウスを作成する。完全型GAD65・GAD67ダブルノックアウトマウスでは全例(n=25)で口蓋裂と臍帯ヘルニアの両方を観察し,完全型GAD67ノックアウトマウスよりも重篤であった。この結果から,口蓋形成および腹壁形成においてGAD67とGAD65の両方の分子が関与することが判明した。
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