幹細胞の分化誘導における分化度の非侵襲的計測法の構築

2008 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 18300144
• Research Institution: Hokkaido University
• Principal Investigator: 高木 睦 Hokkaido University, 大学院・工学研究科, 教授 (20263212)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 藤原 政司 北海道大学, 大学院・工学研究科, 助教 (30229075)
• Keywords: 再生医療 / 細胞分化 / 診断 / 間葉系幹細胞 / 細胞形態 / 非侵襲的

Research Abstract

ヒトMSCから軟骨細胞への分化培養において、MSC特有の複数の表面抗原の有無を定量的に解析することにより、軟骨への分化と細胞形態との関連性のより直接的な証明に資することを目的とした。
TGF-β_3とIGF-1を含む培地を用いて24穴プレート(1.8cm^2)底面上でヒト骨髄由来MSCを分化培養し、細胞形態を解析するとともに免疫蛍光染色によりCD90、CD166の有無を調べた。この時、対照として繊維芽細胞と軟骨細胞を同時に染色し、蛍光輝度値の閾値を決定した。
分化培養後のMSCにおいて、大きい多角形細胞に含まれるCD90陰性またはCD166陰性の細胞の割合は約80%と高く、逆に、CD90陰性またはCD166陰性の細胞に含まれる大きい多角形細胞の割合も60%以上と高かった。この結果は主観的にCD90の有無を判断した従来の結果とほぼ同じであったが、客観的に判断したことから、この細胞診断方法の信頼性は高まったと考えられた。
2重免疫蛍光染色結果の客観的判断と細胞形態解析に基づき、大きい多角形細胞が高い割合でCD90、CD166に陰性であり、軟骨系統細胞に分化している細胞である可能性がより高くなった。

Research Products

• [Journal Article] Correlation between cell morphology and aggrecan gene expression level during differentiation from mesenchymal stem cells to chondrocytes (2008)
  • Author(s): 高木睦, 他
  • Journal Title: Biotechnology Letters 30 Pages: 1189-1195
  • Peer Reviewed
• [Presentation] 移植用接着動物細胞の非侵襲的品質評価法 (2009)
  • Author(s): 高木睦
  • Organizer: 第21回代用臓器・再生医学研究会総会
  • Place of Presentation: 札幌医科大学(札幌)
  • Year and Date: 2009-01-31
• [Presentation] Noninvasive estimation of aggrecan gene expression level based on cell morphological analysis during differentiation from human mesenchvmal stem cells to chondrocvtes (2008)
  • Author(s): 高木睦
  • Organizer: JAACT 2008
  • Place of Presentation: 福岡国際会議場(福岡)
  • Year and Date: 2008-11-26
• [Presentation] Noninvasive estimation of aggrecan gene expression level based on cell morphological analysis during differentiation from human mesenchvmal stem cells to chondrocytes (2008)
  • Author(s): 高木睦
  • Organizer: 13^<th> International Biotechnology Symposium and Exhibition (IBS2008)
  • Place of Presentation: Dalian World Expo Center(大連-中国)
  • Year and Date: 2008-10-14