膜タンパク質・核タンパク質のターゲテドプロテオミクス

2006 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 18310142
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 浜窪 隆雄 東京大学, 先端科学技術研究センター, 教授 (90198797)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 先浜 俊子 東京大学, 先端科学技術研究センター, 産学官連携研究員(特任助教授) (70187061) ; 増田 一之 東京大学, 先端科学技術研究センター, 助手 (20345151)
• Keywords: WTAP / RNAプロセッシング / プロテオミクス / 細胞周期 / GPCR複合体 / γセクレターゼ / ラフト / 血清マーカー

Research Abstract

WTAP(Wilmus tumor associated protein)は癌遺伝子WT1と相互作用するタンパク質として同定されたが、本研究では、ノックアウトマウスや血管内皮細胞(HUVEC)のWTAP-RNAiを用いた解析により、サイクリンA 2 mRNAの安定性を調節することにより、細胞周期を調節していることが明らかにされた。大腸菌強制発現WTAPはサイクリンA 2 mRNAの3 '非翻訳領域に直接結合すること、免疫染色では核内に存在することから、核でのnRNAプロセッシングに関与するタンパク質と考えられた。WTAPの抗体ビーズを用いて、HUVEC核抽出液より複合体を分離し、LC/MSおよびMS/MS/MS解析を行うことにより、10^6個の細胞からWTAPと相互作用する新規タンパク質を数種類同定した。そのうち2種類についてリン酸化部位を検出することができた。アンギオテンシン受容体(AT2)についてバキュロウイルスを用いた免疫を開始した。AT2に相互作用するタンパク質ATIPについて抗体を作成し、抗体ビーズによるターゲテドプロテオミクスの検討を開始した。ケモカイン受容体(CCR5)について、特異抗体を用いてバキュロウイルス発現系による硫酸化修飾の解析を行った。γセクレターゼの複合体解析を開始した。ラフト画分よりLC/MS解析にてγセクレターゼの構成成分の検出に成功した。ニカストリン抗体ビーズを作成し、ターゲテドプロテオミクスを開始した。HUVECよりコレステロール阻害剤(スタチン)により転写調節を受けるタンパク質として同定したペントラキシン(PTX3)は、不安定狭心症の患者血清に有意に上昇してくることが見出され、血清マーカーとして有用であると考えられた。作成した抗体ビーズにより血清中のPTX3(ng/ml程度)を検出する手法の開発に着手した。

Research Products

• [Journal Article] Cooperative interaction between Hepatocyte Nuclear Factor 4{alpha} and GATA transcription factors Regulates ATP-binding cassette sterol transporters ABCG5 and ABCG8. (2007)
  • Author(s): Sumi K, Tanaka T, Uchida A, Magoori K, Urashima Y, Ohashi R, Ohguchi H, Okamura M, Kudo H, Daigo K, Maejima T, Kojima N, Sakakibara I, Jiang S, Hasegawa G, Kim I, Osborne TF, Naito M, Gonzalez FJ, Hamakubo T, Kodama T, Sakai J.
  • Journal Title: Mol Cell Biol. Apr:2
• [Journal Article] Viral envelope protein gp64 transgenic mouse facilitates the generation of monoclonal antibodies against exogenous membrane proteins displayed on baculovirus. (2007)
  • Author(s): Saitoh R, Ohtomo T, Yamada Y, Kamada N, Nezu JI, Kimura N, Funahashi SI, Furugaki K, Yoshino T, Kawase Y, Kato A, Ueda O, Jishage KI, Suzuki M, Fukuda R, Arai M, Iwanari H, Takahashi K, Sakihama T, Ohizumi I, Kodama T, Tsuchiya M, Hamakubo T.
  • Journal Title: J Immunol Methods. Mar:7
• [Journal Article] Expression of Liver X Receptor {alpha} in Rat Fetal Tissues at Different Developmental Stages. (2007)
  • Author(s): Sakamoto A, Kawasaki T, Kazawa T, Ohashi R, Jiang S, Maejima T, Tanaka T, Iwanari H, Hamakubo T, Sakai J, Kodama T, Naito M.
  • Journal Title: J Histochem Cytochem. Mar:7
• [Journal Article] Downregulated P1 promoter-driven hepatocyte nuclear factor-4alpha expression in human colorecal carcinoma is a new prognostic factor against liver metastasis. (2007)
  • Author(s): Oshima T, Kawasaki T, Ohashi R, Hasegawa G, Jiang S, Umezu H, Aoyagi Y, Iwanari H, Tanaka T, Hamakubo T, Kodama T, Naito M.
  • Journal Title: Pathol Int. Feb:57 Pages: 82-90
• [Journal Article] Analysis of PPAR alpha function in human kidney cell line using siRNA. (2006)
  • Author(s): Tachibana K, Anzai N, Ueda C, Katayama T, Kirino T, Takahashi H, Yamasaki D, Ishimoto K, Tanaka T, Hamakubo T, Ueda Y, Arai H, Sakai J, Kodama T, Doi T.
  • Journal Title: Nucleic Acids Symp Ser (Oxf). (50) Pages: 257-258
• [Journal Article] Wilms' tumor 1-associating protein regulates G2/M transition through stabilization of cyclin A2 mRNA. (2006)
  • Author(s): Horiuchi K, Umetani M, Minami T, Okayama H, Takada S, Yamamoto M, Aburatani H, Reid PC, Housman DE, Hamakubo T, Kodama T.
  • Journal Title: Proc Natl Acad Sci USA. Nov 14:103(46) Pages: 17278-83
• [Journal Article] Three-dimensional structure of the gamma-secretase complex. (2006)
  • Author(s): Ogura T, Mio K, Hayashi I, Miyashita H, Fukuda R, Kopan R, Kodama T, Hamakubo T, Iwatsubo T, Tomita T, Sato C.
  • Journal Title: Biochem Biophys Res Commun. May5:343(2) Pages: 525-534
• [Journal Article] Dysregulated expression of P1 and P2 promoter-driven hepatocyte nuclear factor-4alpha in the pathogenesis of human cancer. (2006)
  • Author(s): Tanaka T, Jiang S, Hotta H, Takano K, Iwanari H, Sumi K, Daigo K, Ohashi R, Sugai M, Ikegame C, Umezu H, Hirayama Y, Midorikawa Y, Hippo Y, Watanabe A, Uchiyama Y, Hasegawa G, Reid P, Aburatani H, Hamakubo T, Sakai J, Naito M, Kodama T.
  • Journal Title: J Pathol. Apr:208(5) Pages: 662-672