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2006 Fiscal Year Annual Research Report

新規C末端特異的誘導体化によるプロテオミクス解析法の開発

Research Project

Project/Area Number 18310146
Research InstitutionNara Women's University

Principal Investigator

中沢 隆  奈良女子大学, 理学部, 助教授 (30175492)

Keywordsプロテオミクス / タンパク質 / C末端アミノ酸配列分析 / 化学修飾 / 質量分析 / MALDI-MS / 活性エステル / C末端標識
Research Abstract

初期のC末端標識法は、タンパク質のC末端カルボキシル基を活性エステルの形で求核剤と反応させる反応スキームを用いていた。そこで、アミノ基またはヒドラジノ基を求核性の反応基として含み、同時にマトリックス支援レーザー脱離/イオン化(MALDI)質量分析の検出感度を向上させるための安定な正電荷をもつ基も含む標識試薬が、この反応スキームに適切であると考えられる。実際、その条件を満たす試薬の一つとして、2-ヒドラジノイミダゾリン(Imz-NHNH_2)を用いて、いくつかのタンパク質についてC末端の標識とプロテアーゼ消化を行い、生成物のMALDI質量分析によりC末端ペプチド由来のピークを検出することができた。この成果は論文(Yamaguchi, M.et al.Anal.Chem.78,7861-7869(2006))に報告した通りである。しかし同時にこの反応の問題点もいくつか明らかになった。その一つは活性エステルを用いてもC末端標識の収率が低いことである。そのため、必ずしもすべてのタンパク質でC末端ペプチドのピークは検出できず、方法としての一般性に欠けることになる。第二に、標識の効率が低いと、C末端ペプチドのピークと他のピークを区別することが困難になる欠点がある。この問題は、例えば同位体標識した標識試薬によって、C末端ペプチドのピークに特徴的な形状を与えて解決することが可能であるが、次の第三の問題とともに解決するために、別の種類の標識試薬を探した。第三の問題とは、Imz-NHNH_2を標識したペプチドは比較的感度よく検出できるが、そのPSD(post source decay)スペクトルからアミノ酸配列を読み取ることが極めて困難な点である。そこで、C末端を活性化したタンパク質にヒドラジンを作用させて求核性を持つヒドラジドとした後、これに求電子剤を反応させて標識する改良法を開発した。

  • Research Products

    (6 results)

All 2007 2006

All Journal Article (4 results) Book (1 results) Patent(Industrial Property Rights) (1 results)

  • [Journal Article] Tautomerism of histidine 64 associated with proton-transfer in catalysis of carbonic anhydrase2007

    • Author(s)
      Hideto Shimahara
    • Journal Title

      Journal of Biological Chemistry 282

      Pages: 9646-9656

  • [Journal Article] Chemistry in Proteomics : An inteiplay between classical methods in chemical modification of proteins and mass spectrometry at the cutting edge2006

    • Author(s)
      Takashi Nakazawa
    • Journal Title

      Current Proteomics 3(1)

      Pages: 33-54

  • [Journal Article] Enhancement of MALDI-MS spectra of C-terminal peptides by the modification of proteins via an active ester generated in situ from an oxazolone2006

    • Author(s)
      Minoru Yamaguchi
    • Journal Title

      Analytical Chemistry 78(22)

      Pages: 7861-7869

  • [Journal Article] C-Terminal activation of peptides with an active ester via an oxazolone2006

    • Author(s)
      Mutsumi Oka
    • Journal Title

      Peptide Science 2006

      Pages: 325-326

  • [Book] 生命元素事典(桜井 弘編)第4章2-7 金属錯体と金属クンパク質の質量分析2006

    • Author(s)
      中沢 隆, 矢野重信
    • Total Pages
      407-411
    • Publisher
      オーム社
  • [Patent(Industrial Property Rights)] タンパク質又はペプチドのC末端修飾法、C末端固定化法、及び解析法2006

    • Inventor(s)
      中澤 隆ほか8名
    • Industrial Property Rights Holder
      奈良女子大学(4), 島津製作所(4), 大阪大学(2)
    • Industrial Property Number
      原出願(特願2005-30783 1)に関わるPCT出願
    • Filing Date
      2006-10-20

URL: 

Published: 2008-05-08   Modified: 2016-04-21  

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