2008 Fiscal Year Annual Research Report
| Project/Area Number |
18380008
|
|---|
| Research Institution | National Institute for Basic Biology |
|---|
Principal Investigator |
寺田 理枝 National Institute for Basic Biology, 分子遺伝学研究部門, 助教 (30137799)
|
|---|
| Keywords | イネ / 遺伝子ターゲティング / 相同組換え / Adh / Cre / loxP / アグロバクテリウム / T-DNA / 遺伝子スイッチ |
|---|
| Research Abstract |
本課題では、強力なポジティブ・ネガティブ選抜によるイネターゲティング法の機能ゲノム学推進に向けた実用化を目指し、組換え機構の理解を進めつつ、ゲノム改変を効果的に行うため、以下の課題を進めた。これまでにCre遺伝子を一過的に発現させることで、Waxy遺伝子の第一イントロンに挿入したマーカー領域の削除を行い、再生植物での物Waxy遺伝子の発現を花粉で確認した。しかし、再生植物体は不稔となったため、詳しい解析には至らなかった。次いでエストロゲン誘導型プロモーター制御下でCreを発現することで、Waxy、アルコール脱水素酵素遺伝子(Alcohol dehydrogenase)のAdh2、Adh1のターゲティング改変体での、破壊遺伝子の復帰を検討した。エストロゲン誘導型プロモーターを持つCre遺伝子を、Waxy、Adh2、Adh1のターゲティング破壊系統から誘導したカルスに再導入後、誘導条件を検討してCreの発現を行った。PCRによる解析のレベルではWaxy、Adh2、Adh1の遺伝子領域に挿入されたポジティブマーカーとトランスポゾン由来転写終止領域の削除が確認できたが、再分化植物の不稔の傾向が極めて高く、Waxy、Adh1の機能復帰植物は、ほとんどが不稔となった。Adh1のターゲティング改変体で1系統のみ数個の種子を得たので、機能復帰の状態を発芽種子で確認した上で、分子レベルでの解析を進行中。イネの相同組換え能を強化したターゲティング法の改革については、従来の強力なポジティブ・ネガティブ選抜によるイネターゲティング法の効率化の実現に向けて、形質転換法の各条件を再検討し、極めて効果的な方法になりつつあり、相同組換え機構の分子レベルの仕組みの解析を行った。
|
Research Products
(5 results)
-
-
[Presentation] Targeted Disruption of the OsDRM1a Gene, a Rice Homolog of DOMAINS REARRANGED METHYLTRANSFERASE, by Homologous Recombination2008
Author(s)
Satoru Moritoh, Rie Terada, Yasuyo Johzuka-Hisatomi, Chang-Ho Eun, Katsushi Yamaguchi, Akemi Ono, Shigeru Iida
Organizer
The 55^<th> NIBB Conference Arabidopsis Workshop
Place of Presentation
Okazaki Conference Centor, aichi, Japan
Year and Date
20080913-20080915
-
-
[Book] Homologous recombination-dependent gene targeting and an active DNA transposon nDart-promoted gene tagging for rice functional genomics. Rice Biology in the Genomics Era (Biotechnology in Agriculture and Forestry) H. Hirano, Y. Sano, A. Hirai, T. Sasaki (eds)2008
Author(s)
Y. Johzuka-Hisatomi, M. Maekawa, K. Takagi, C-H. Eun, T. Yamauchi, Z. Shimatani, N. Ahmed, H. Urawa, K. Tsugane, R. Terada, S. Iida
Total Pages
14
Publisher
Springer
-
