2007 Fiscal Year Annual Research Report
網膜解毒機構としての網膜関門排出輸送担体の同定と生理的役割
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18390048
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| Research Institution | University of Toyama |
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Principal Investigator |
細谷 健一 University of Toyama, 大学院・医学薬学研究部, 教授 (70301033)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
立川 正憲 富山大学, 大学院・医学薬学研究部, 助教 (00401810)
畑中 保丸 富山大学, 大学院・医学薬学研究部, 教授 (30111181)
水口 峰之 富山大学, 大学院・医学薬学研究部, 助教授 (30332662)
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| Keywords | 血液網膜関門 / マイクロダイアリシス法 / OAT / 排出輸送 / 免疫染色 / p-aminohiuric acid |
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| Research Abstract |
血液網膜関門(BRB)は、網膜内の神経活動で産生される神経伝達物質やホルモンの代謝物である有機アニオンおよび網膜内に移行した薬物を排出する解毒機構を有すると考えられるが、その機構は今のところ不明である。本研究は、BRBにおける有機アニオン排出輸送機構を解明し、その輸送担体を同定することを目的とした。モデル有機アニオンとして、p-[^3H]aminohippuric acid([^3H]PAH)とbulk flowマーカーとして、[^<14>C]D-mannitolとを同時に硝子体内に投与し、マイクロダイアリシス法を用いて硝子体における[^3H]標識薬物と[^<14>C]D-mannitolの濃度推移を測定し、[^3H]PAHのBRBを介した排出輸送を評価した。内側血液網膜関門(iBRB)のmRNA発現量は、磁気ビーズ標識抗CD31抗体を用いてiBRBの実体である網膜毛細血管内皮細胞を単離し、リアルタイム定量PCRを用いて解析した。[^3H]PAHの硝子体からの消失速度定数は[^<14>C]D-mannitolの消失速度定数よりも約2倍高いことが示され、PAHの硝子体からの消失は眼房水等からのbulk flowだけでなくBRBを介して排出されていることが示唆された。さらに、有機アニオントランスポーター(OAT)の基質や阻害剤であるPAH、benzylpenicilin、probenecidおよびsulfobromophthalein存在下において、[^3H]PAHの排出は有意に阻害された。以上の結果から、[^3H]PAHのBRBを介した排出にはOATが関与していることが示唆された。OAT発現解析からOAT3がmRNAおよびタンパクレベルで網膜血管内皮細胞において発現していることが示された。さらに、二重免疫染色解析法からrOAT3は網膜毛細血管内皮細胞のabluminal側に局在していることが示唆された。以上の結果から、PAHは硝子体から血液側へBRBの輸送担体を介して排出輸送されており、その排出には少なくともOAT3が関与していることが示唆された。
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Research Products
(10 results)
