2008 Fiscal Year Annual Research Report
精子形成細胞アポトーシスを誘導させるエピジェネテックス因子の分子的解析
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18390060
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| Research Institution | Nagasaki University |
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Principal Investigator |
小路 武彦 Nagasaki University, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (30170179)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
菱川 善隆 長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 准教授 (60304276)
和泉 伸一 長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教 (40264246)
安 樹才 長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教 (30404213)
佐藤 陽子 長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教 (50398963)
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| Keywords | 精子形成細胞 / DNAのメチル化 / 分子組織化学 / ヒストン蛋白修飾 / 免疫組織化学 / ヘテロクロマチン化 / アポトーシス / 初代培養 |
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| Research Abstract |
受精に伴う生命プログラムの初期化を理解する上で、生殖細胞特有の頻回なアポトーシスから免れる機構の解明は極めて重要である。本研究では、精子形成過程は規則的なDNAのヘテロクロマチン化であると捉え、DNA局所のメチル化やヒストンタンパク質のリン酸化及び脱アセチル化等のエピジェネテックな調節機構の破綻が精子形成細胞アポトーシス誘導の細胞内因子となる可能性をin vivo及びin vitroで検討することを目的とした。本年度は、昨年度の検討結果を踏まえ、切片上でCCGG配列のメチル化部位と非メチル化部位を視覚的に識別し定量できる方法論をHELMET法として公表(Histochem Cell Biol130:917-925(2008))すると共に特許申請した。また本法により正常成熟雄マウス(ICR)精巣のパラフィン試料を解析した結果、メチル化部位と非メチル化部位との染色比は生殖細胞の分化毅階によって顕著に変化することを見い出した。またTUNEL陽性細胞DNAは脱メチル化されていることも再確認した。一方、ヘテロクロマチン化に関与すると思われるArgonaute-2に関してマウス精巣切片にて解析を進めたが、mRNAの発現量が他組織と比較して有意に低く、生殖細胞分化段階との関連は不明であった。またヘテロクロマチン部位に局在が知られるheterockromatin protein 1α(HP1α)が、ヒストンH3のリン酸化Ser^<10>及びアセチル化Lys^9と精祖細胞並びに精母細胞の分裂期に共発現するが、アポトーシス細胞のマーカーとなるBax陽性細胞では陰性であった。一方、多機能を維持したSertoli細胞培養株と分離精子形成細胞の共培養系の解析を進め、in vivoでpEYFP-Mito遺伝子を導入した精祖細胞をSertoli細胞培養株上で培養することに成功し、アネキシンVとの共染色による生体観察によりアポトーシス誘導下での生殖細胞ミトコンドリアの挙動の検討が可能となった。
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