2008 Fiscal Year Annual Research Report
デュシャンヌ型筋ジストロフィー遺伝子治療を目指したヒト人工染色体ベクターの作製
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18390107
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| Research Institution | Tottori University |
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Principal Investigator |
押村 光雄 Tottori University, 大学院・医学系研究科, 教授 (20111619)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
加藤 基伸 鳥取大学, 医学部, 助教 (00273904)
香月 康宏 鳥取大学, 大学院・医学系研究科, 助教 (90403401)
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| Keywords | ヒト人工染色体 / 遺伝子治療 / 筋ジストロフィー / 染色体工学 / 間葉系幹細胞 / ES細胞 |
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| Research Abstract |
デュシャンヌ型筋ジストロフィー(DMD)はヒトX番染色体上に存在するDMD遺伝子の機能欠損により引き起こされる進行性筋萎縮症である。DMD遺伝子は全長2.4Mbにも及ぶことからDMDの完全な遺伝子治療は現時点では不可能であった。これまでに我々は巨大な遺伝子を染色体レベルで搭載可能なヒト人工染色体(HAC)ベクターの開発を行ってきた。本研究においてDMD遺伝子をクローニングしたヒト人工染色体ベクターを用いたex vivo細胞遺伝子治療を目指して以下の研究を行った。
自殺遺伝子TKを搭載したDMD-HACを保持するマウスES細胞をヌードマウス皮下に移植し、ガンシクロビルまたはPBSの投与を行った。コントロールのマウスES細胞ではガンシクロビル投与群とPBS投与群に優位差はないのに対し、DMD-HAC導入ヒトマウスESではガンシクロビル投与群において腫瘍の増殖が優位に抑えらた。次にこれまでに、構築・精製したDMD-HACをマウスES細胞(B6系統)にMMCT法にて移入後キメラマウスを作製した。このマウスを用いて各種組織においてDMD遺伝子の組織特異的スプライシングバリアントがヒトと同様に発現しているかをRT-PCR法を用いて解析したところ、脳特異的アイソフォームは脳特異的に、筋肉特異的なアイソフォームは筋肉特異的に発現が観察され、筋肉において細胞膜周辺にジストロフィン遺伝子が発現することが免疫蛍光染色により明らかとなった。
以上のことからDMD-HACが安全な遺伝子治療に利用できるベクターであることが示唆された。
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