チンパンジー、新世界サルを用いたC型肝炎のRNA干渉による遺伝子治療

2006 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 18390215
• Research Institution: Tokyo Medical and Dental University
• Principal Investigator: 横田 隆徳 東京医科歯科大学, 大学院医歯学総合研究科, 助教授 (90231688)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 明里 宏文 独立行政法人医薬基盤研究所, 霊長類医科学研究センター, 研究リーダー (20294671) ; 榎本 信幸 山梨大学, 医学工学総合研究部, 教授 (20251530)
• Keywords: RNA干渉 / siRNA / カチオニックベクター / C型肝炎 / タマリン / AAV8 / GBV-B / インターフェロン

Research Abstract

1)タマリンでのGBV-B肝炎モデルでのsiRNAによる治療実験
siRNAに化学修飾することにより、インターフェロンを誘導しない修飾方法を見出したので、マウスにて実証の後、タマリンによるGBV-B肝炎モデルでのsiRNAによる治療実験を行った。1,3x10^8GEのGBV-Bの接種後、3回/週GBV-Bに対する20mg/kg化学合成siRNAをカチオニックベクターに包埋して下肢の静脈から投与したところ、治療群において投与6週後transaminasesの低下傾向を認めた。今後ウイルス抑制増殖効果について評価する。
2)AAV8 shRNA毒性とその対策
2006年6月にscAAV-8を用いたshRNAの全身投与にて、遅発性の致死的な重篤な肝障害があるとの重要な報告された(Grimm D, Nature 441;537-541,2006)。この肝障害は導入したsiRNAの発現量に依存し、複数の異なった標的遺伝子に対するshRNAにおいて生じており、複数のmicroRNA(miRNA)の低下を伴っていた。我々もマウスにおいて同様の肝障害を経験しているが、scAAVではなくて1x10^<12> ssAAV(尾静脈からの投与)を用いることにより、明らかなshRNA毒性を認めず、肝臓で有効な標的遺伝子の発現抑制に成功した。過剰なshRNAは細胞毒性を引き起こす可能性があるが,shRNAの発現を適切に調節すれば,副作用なく有効なRNAi効果が得られると考えられる。今後、このAAV8を用いてshRNAによるウイルス抑制増殖効果について評価したい。

Research Products

• [Journal Article] Increase of disease duration of amyotrophic lateral sclerosis in a nouse model by transgenic small interfering RNA. (2007)
  • Author(s): Yokoya T, Sasaguri H, Yamada H, Unno N, Yamamoto T, Kubodera T, Anzai M, Mitani T, Mizusawa H
  • Journal Title: Arch Neurol 64 Pages: 145-146
• [Journal Article] siRNAを用いたALSの遺伝子治療 (2007)
  • Author(s): 横田隆徳
  • Journal Title: 医学のあゆみ。 (印刷中)
• [Journal Article] 脳血管内皮細胞をターゲットとしたsiRNAを用いた遺伝子治療の可能性 (2006)
  • Author(s): 横田隆徳
  • Journal Title: Neuroimmunology 14 Pages: 141-145
  • Description: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [Journal Article] In vivo delivery of small interfering RNA targeting brain capillary endothelial cells. (2006)
  • Author(s): Hino T, Yokoya T, Ito S, Nishina K, Kang YS, Mori S, Kanda T, Terasaki T, Mizusawa H.
  • Journal Title: Biochem Biophys Res Commun. 340 Pages: 263-267
• [Journal Article] siRNAiの核酸医薬としての可能性. (2006)
  • Author(s): 横田隆徳
  • Journal Title: 分子細胞治療 5 Pages: 231-236
• [Journal Article] RNA干渉によるアルツハイマー病治療の可能性 (2006)
  • Author(s): 横田隆徳
  • Journal Title: Progress in Medicine 26 Pages: 441-445
• [Journal Article] Negative regulation of intracellular hepatitis C virus replication by interferon regulatory factor 3. (2006)
  • Author(s): Yamashiro T, Sakamoto N, Kurosaki M, Kanazawa N, Tanabe Y, Nakagawa M, Chen CH, Itsui Y, Koyama T, Takeda Y, Maekawa S, Enomoto N, Sakugawa H, Watanabe M
  • Journal Title: J Gastroenterol. 41 Pages: 750-757
• [Journal Article] Expressional screening of interferon-stimulated genes for antiviral activity against hepatitis C virus replication. (2006)
  • Author(s): Itsui Y, Sakamoto N, Kurosaki M, Kanazawa N, Tanabe Y, Koyama T, Takeda Y, Nakagawa M, Kakinuma S, Sekine Y, Maekawa S, Enomoto N, Watanabe M.
  • Journal Title: J Viral Hepat. 13 Pages: 690-700
• [Journal Article] Site-specific mutation of the interferon sensitivity-determining region (ISDR) modulates hepatitis C virus replication. (2006)
  • Author(s): kohashi T, Maekawa S, Sakamoto N, Kurosaki M, Watanabe H, Tanabe Y, Chen CH, Kanazawa N, Nakagawa M, Kakinuma S, Yamashiro T, Itsui Y, Koyama T, Enomoto N, Watanabe M.
  • Journal Title: J Viral Hepat. 13 Pages: 582-90
• [Journal Article] Analysis of prognostic factors in therapeutic responses to inteerferon in patients with chronic hepatitis C. (2006)
  • Author(s): Hosogaya S, Ozaki Y, Enomoto N, Akahane Y.
  • Journal Title: Transl Res. 148 Pages: 79-86