| Research Abstract |
我々は肺癌の遺伝子治療としてWntシグナル抑制とTM4SF誘導の両面から,腫瘍のプログレッションを包括的に抑制する癌遺伝子治療の研究を行っている.Wnt抑制ベクター作製のため,Wnt1とWnt2b1,Wnt5aに対する合成siRNA(short interfering RNA)をそれぞれ3種類作製した.リポフェクション法でこれら合成siRNAをヒト癌細胞株ヘトランスフェクションし,それぞれの遺伝子発現と蛋白発現を定量し,Wnt1とWnt2b1,Wnt5aの発現抑制に最適なsiRNA配列を決定した.次に,shRNA(short hairpin RNA)発現プラスミドベクターを作製するために,決定したsiRNA配列を元にセンス配列とループ配列,アンチセンス配列を含むshRNA配列を設計した,そしてヒトU6プロモーターを搭載したpBAsi-hU6 DNAプラスミドベクターに,これらのshRNA配列を組入れ,Wnt1, Wnt2b1, Wnt5aの発現抑制shRNA発現プラスミドベクターをそれぞれ作製した.リポフェクション法で,これらWnt抑制shRNA発現プラスミドベクターを細胞株にトランスフェクションすると,良好な発現抑制がそれぞれにみられた.更にこのshRNA発現プラスミドベクターからヒトU6プロモーターとshRNA配列を切り出し,COS-TPC法でWnt抑制shRNA発現アデノウィルスベクターを我々は作製した.これらWnt抑制shRNA発現アデノウィルスベクターの濃縮・精製も行い,担癌ヌードマウスによる遺伝子治療実験を追加検討中である.一方,我々はTM4SFのメンバーである癌転移抑制遺伝子CD9の発現誘導アデノウィルスベクターを用いて,癌転移機序の解明と癌転移抑制遺伝子治療の研究も行っている.その結果,CD9遺伝子誘導によりWAVE2発現が抑制されラメリポディアが減少することが,CD9による細胞運動抑制の一因であることを我々は示した(Huang et al, Oncogene 2006).更に我々はWnt抑制とTM4SF誘導を効率よく行うため,カクテルベクターの作製も行っている.
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