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2006 Fiscal Year Annual Research Report

鋭敏な聴覚の源であるモーター蛋白質プレスチンの精製とそれを用いた構造と機能の解明

Research Project

Project/Area Number 18390455
Research InstitutionTohoku University

Principal Investigator

和田 仁  東北大学, 大学院工学研究科, 教授 (30111264)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 小林 俊光  東北大学, 大学院医学系研究科, 教授 (80133958)
熊谷 泉  東北大学, 大学院工学研究科, 教授 (10161689)
池田 勝久  順天堂大学, 医学部, 教授 (70159614)
津本 浩平  東京大学, 大学院新領域創成科学研究科, 助教授 (90271866)
Keywords国際研究者交流 / アメリカ / 膜タンパク質 / Prestin / 精製 / 等温滴定型カロリメトリー
Research Abstract

Prestinは哺乳類内耳外有毛細胞の細胞膜に高密度に発現している膜タンパク質である.細胞膜電位が変化すると,prestinは細胞内の陰イオンを輸送し,それに伴い構造変化すると考えられている.そして,その構造変化は外有毛細胞の伸縮運動を引き起こすと推察されている.Prestinについてその同定以来様々な研究が行われてきたが,prestinの形状や構造変化メカニズムは解明されていない.そこで本研究では,これまでに構築したFLAGタグ融合型prestinを安定発現する細胞からprestinを抽出精製し,精製prestinの活性を等温滴定型カロリメータを用いて評価した.
まず,prestinを細胞から抽出するため,12種類の界面活性剤から最適なものを限界ミセル濃度及び細胞の可溶化率に基づき選択した.抽出したprestinを,FLAGタグを利用しアフィニティークロマトグラフィーで精製した.Prestinの精製度はSDS-PAGEで評価し,以降の実験に十分な純度まで精製できていることを確認した.次に,精製prestinが活性を有しているか,精製prestinと塩化物イオンとの相互作用を等温滴定型カロリメトリーにより評価した.その結果,精製prestinは塩化物イオンと相互作用し,活性を有していることが示された.今後,精製prestinを脂質二重層の平面膜にならびにリポソームに再構成し,精製prestinの形状を原子間力顕微鏡で,電気特性をパッチクランプ法で明らかにすることを目指す.

  • Research Products

    (4 results)

All 2006

All Journal Article (4 results) (of which Peer Reviewed: 1 results)

  • [Journal Article] Imaging by atomic force microscopy of the plasma membrane of prestin-transfected Chinese hamster ovary cells2006

    • Author(s)
      Michio Murakoshi
    • Journal Title

      Journal of the Association for Research in Otolaryngology 7

      Pages: 267-278

    • Description
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Local mechanical properties of mouse outer hair cells : Atomic force microscopic study2006

    • Author(s)
      Michio Murakoshi
    • Journal Title

      Auris Nasus Larynx 33

      Pages: 149-157

  • [Journal Article] Effects of heat stress on Young's modulus of outer hair cells in mice2006

    • Author(s)
      Michio Murakoshi
    • Journal Title

      Brain Research 1107

      Pages: 121-130

  • [Journal Article] Analysis of the dynamic behavior of the inner hair cell stereocilia by the finite element method2006

    • Author(s)
      Toshihiro Matsui
    • Journal Title

      JSME International Journal 49C

      Pages: 828-836

URL: 

Published: 2008-05-08   Modified: 2016-04-21  

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