2009 Fiscal Year Annual Research Report
角膜疾患に対する遺伝子導入・細胞移植・再生医学による総合的治療
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18390473
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| Research Institution | National Research Institute for Child Health and Development |
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Principal Investigator |
東 範行 National Research Institute for Child Health and Development, 病院第二専門診療部・眼科, 医長 (10159395)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
仁科 幸子 国立成育医療センター(研究所), 病院第二専門診療部・眼科, 医師 (40237954)
横井 匡 国立成育医療センター(研究所), 病院第二専門診療部・眼科, 医師 (80514025)
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| Keywords | 再生医学 / 遺伝学 / 角膜 |
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| Research Abstract |
片眼性網膜芽細胞腫の1歳患児より得られた摘出眼の半球から、角膜を輪部より切除し、デスメ膜とともに角膜内皮を分離した。TypeIV collagenでコートした30mm培養皿上に培養液(DMEM/F12(GIBCO 11320),15%FBS,20ng/ml bFGF)0.8mlで培養した。培養3日目には内皮細胞がデスメ膜より増殖し始め、7日目に継代し培養を継続した。P4にて、その遺伝子発現、蛋白発現、機能を解析した。RT-PCRにおいては、角膜内皮細胞に発現する、Na-k ATPase,SLC4A4,CLCN3,VDAC3の発現を認めた。DNA microarrayにおいて細胞膜能動的輸送、細胞骨格、細胞内小器官、細胞周期、細胞増殖等に関して遺伝子発現プロファイルを作成した。蛋白発現は、細胞が密になり、さらに角膜内皮の形態である多角形になったday40に免疫染色を行った。Tight junctionを染色するZo-1は、多角形の細胞間に一致して染色された。Na-k ATPaseは細胞全体が染色され陽性であった。内皮機能の分析は、Ussing chamberを用いた。簡潔には、小孔のある直径12mmのポリエステル膜をTypeIV collagenでコートし、その膜上で内皮細胞をシート状に培養した後、Na-K ATPaseの能動輸送によって生じる電流を測定するものである。結果、平均183mAの電流が測定され、培養細胞は、内皮細胞としての蛋白、遺伝子発現のみならず、ポンプ機能を十分に保持していることが確認された。
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[Journal Article] Pax6-5a promotes neuronal differentiation of murine embryonic stem cells2009
Author(s)
Shimizu N, Watanabe H, Kubota J, Wu J, Saito R, Yokoi T, Era T, Iwatsubo T, Watanabe T, Nishina S, Azuma N, Katada T, Nishina H.
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Journal Title
Biol Pharm Bull 32
Pages: 999-1003
Peer Reviewed
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[Journal Article] CrxOS maintains self-renewal of murine embryonic stem cells2009
Author(s)
Saito R, Yamasaki T, Nagai Y, Wu J, Kajiho H, Yokoi T, Noda E, Nishina S, Niwa H, Azuma N, Katada T, Nishina H.
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Journal Title
Biochem Biophys Res Commun 2
Pages: 1129-1135
Peer Reviewed
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