2008 Fiscal Year Annual Research Report
歯周組織再生を制御する転写因子と骨シアロタンパク質の発現調節機構
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18390563
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| Research Institution | Nihon University |
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Principal Investigator |
小方 頼昌 Nihon University, 松戸歯学部, 教授 (90204065)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中尾 寿美 日本大学, 松戸歯学部, 助手 (20102577)
増永 浩 日本大学, 松戸歯学部, 講師 (40229381)
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| Keywords | 遺伝子プロモーター / 転写調節 / 石灰化 / 骨芽細胞 / 遺伝子発現 / 転写因子 / 成長因子 / ホルモン |
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| Research Abstract |
ROS17/2.8骨芽細胞様細胞をFGF2(10ng/ml)で経時的に刺激すると、BSP mRNA量は刺激6時間以降に増加した。Runx2のタンパク発現をウェスタンブロットで検索した結果、FGF2(10ng/ml)刺激3時間で増加した。ルシフェラーゼアッセイの結果、-116および-938塩基対上流までのラットBSP遺伝子プロモーターを含むルシフェラーゼコンストラクトの転写活性は、FGF2(10ng/ml、12時間)刺激で上昇した。2塩基対の変異を導入したミューテーションルシフェラーゼアッセイの結果、FGF2の作用は、転写開始点から約-90塩基対上流に存在するFREおよび-931〜-906塩基対上流に存在するAP1配列と重複したグルココルチコイド応答配列(APl/GRE)の2つの応答配列を介すると考えられた。リン酸化阻害剤を用いたルシフェラーゼアッセイの結果、FGF2刺激後の細胞内情報伝達系は、チロシンおよびSrcチロシンリン酸化とMAPキナーゼ系を介すると考えられた。ROS17/2.8細胞をFGF2(10ng/ml)にて刺激すると、FREとAPl/GREに結合する核内タンパク質は3および6時間後に増加し、FREと核内タンパク質との結合の変化は、チロシンリン酸化阻害剤であるハービマイシンAにより抑制された。抗体を用いたゲルシフトアッセイの結果、APl/GREに結合するタンパク質は、抗c-Fosおよび抗Smad1抗体で結合バンドが高分子領域へ移動(スーパーシフト)し、抗c-Junおよび抗Dlx5抗体で結合バンドが消失した。以上の結果から、FGF2はFREおよびAP1/GRE配列を介してBSPの転写を調節し、AP1/GRE配列には、c-Jun、c-Fos、Dlx5およびSmad1の複合体が結合していると考えられた。
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