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2007 Fiscal Year Annual Research Report

新規ペプチドrelaxin3の神経系における機能形態学的解析

Research Project

Project/Area Number 18500268
Research InstitutionKyoto Prefectural University of Medicine

Principal Investigator

田中 雅樹  Kyoto Prefectural University of Medicine, 医学研究科, 准教授 (80264753)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 飯島 典生  京都府立医科大学, 医学研究科, 助教 (00285248)
渡邊 義久  京都府立医科大学, 医学研究科, 助教 (50363990)
Keywordsrelaxin 3 / development / gene expression / PCPA / serotonin / cAMP
Research Abstract

Insulin super familyに属するrelaxin3/Insulin like peptid7と呼ばれる新規脳ペプチドについて、機能形態研究を進めてきた。これまでに免疫組織化学法やin situ hybridization法を用いて、脳内における発現部位を同定し、平成18年度からは脳幹でのラット発育期における経時的な発現変化を検索して遺伝子は胎生18日より、ペプチドは出生時から検出できることを明らかにした。またrelaxin3遺伝子発現に対するセロトニン(5-HT)ニューロンの影響を調べ、5-HTの枯渇剤であるp-chlorophenylalanineを投与すると遺伝子発現が約1.5倍に増加することが分かり、5-HTにより抑制性に支配を受けていることを示して、Regulatory Peptides誌に報告した。5-HTやストレスで遺伝子発現が変動することから、次に遺伝子発現の制御機構について研究を展開した。relaxin3が神経系の培養細胞株Neuro2aに発現することを発見し、プロモーター領域にリポーターとしてEGFP遺伝子を連結させたベクターをNeuro2aに遺伝子導入し、さらにG418の選択により安定発現株を作製した。種々の薬剤を投与してEGFPの蛍光強度を測定したところ、細胞内cAMPを増加させるdibutyryl cAMPやforskolinにより有意に蛍光強度が増加した。またPKAの特異的な阻害剤であるH89投与によりその作用が抑制された。relaxin3ニューロンはCRF-R1受容体を発現しているので、細胞株に強制発現させて、CRFを投与したところ、有意にrelaxin3のプロモーターが活性化された。これらの結果よりrelaxin3遺伝子はcAMP-PMAのsignal pathwayを介して転写が亢進されていることがわかり、おそらく生体内でも同様の機序で転写亢進されることが想定される。次に上流プロモーターの活性化部位の詳細を明らかにするため種々の欠損領域をもつ変異体を作製してリポーターアッセイを行ったところ、exon1開始点の上流67-117bpの50塩基対が活性化に重要であることが判明した。これらの成果をまとめて現在Journal of Neuroscience Research誌に投稿中である。同様の研究手法で新規のセリンプロテアーゼspinesinの遺伝子発現にcAMPが関与することを明らかにして、研究成果はJ Neurosci Res誌2008年度版に掲載された。

  • Research Products

    (12 results)

All 2008 2007 Other

All Journal Article (2 results) (of which Peer Reviewed: 2 results) Presentation (9 results) Remarks (1 results)

  • [Journal Article] Developmental expression and serotonergic regulation of relaxin3/INSL7 in the nucleus incertus of rat brain.2008

    • Author(s)
      Miyamoto Y, Watanabe Y, Tanaka M
    • Journal Title

      Regulatory Peptides 145

      Pages: 54-59

    • Description
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] The cAMP-dependent regulation of spinesin/TMPRSS5 gene expression in atrocytes.2008

    • Author(s)
      Yamaguchi T, Watanabe Y, Tanaka M, Nakagawa M, Yamaguchi N
    • Journal Title

      Journal of Neuroscience Research 86

      Pages: 610-617

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] ラット脳におけるrelaxin3/INSL7の発育期発現とセロトニンにおける発現調節2008

    • Author(s)
      宮本容正、渡邊義久、田中雅樹
    • Organizer
      第82回日本解剖学会・近畿支部学術集会
    • Place of Presentation
      京都
    • Year and Date
      2008-11-17
  • [Presentation] Spinesin/TMPRSS5遺伝子のアストロサイトにおけるcAMP依存性発現制御2008

    • Author(s)
      山口達之、渡邊義久、田中雅樹、中川正法、山口希
    • Organizer
      第82回日本解剖学会・近畿支部学術集会
    • Place of Presentation
      京都
    • Year and Date
      2008-11-17
  • [Presentation] 神経特異的遺伝子群を制御する転写因子NRSFの新規結合遺伝子の解析2008

    • Author(s)
      鳴瀬義久、青木勉、廣瀬英司、渡邊義久、田中雅樹、星伴路、森望、松浦忠夫
    • Organizer
      第82回日本解剖学会・近畿支部学術集会
    • Place of Presentation
      京都
    • Year and Date
      2008-11-17
  • [Presentation] ストレス、摂食調節ペプチドrelaxin3の発現調節機構2008

    • Author(s)
      田中 雅樹、渡邊 義久
    • Organizer
      第5回GPCR研究会
    • Place of Presentation
      東京
    • Year and Date
      2008-05-09
    • Description
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [Presentation] ストレス、摂食調節ペプチドrelaxin3の発現調節機構2008

    • Author(s)
      田中雅樹、渡邊義久
    • Organizer
      第113回日本解剖学会総会シンポジウム
    • Place of Presentation
      大分
    • Year and Date
      2008-03-27
  • [Presentation] 新規ストレス応答遺伝子relaxin3の発現調節解析2007

    • Author(s)
      渡邊 義久、田中 雅樹
    • Organizer
      第3回3大学連携フォーラム
    • Place of Presentation
      京都
    • Year and Date
      2007-12-21
    • Description
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [Presentation] Regulation of relaxin 3 gene expression2007

    • Author(s)
      Tanaka M, Watanabe Y, Yoshimoto K
    • Organizer
      Annual Meeting of the Society for Neuroscience
    • Place of Presentation
      San Diego
    • Year and Date
      2007-11-05
    • Description
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [Presentation] Relaxin3遺伝子の発現調節解析2007

    • Author(s)
      渡邊義久、吉本寛司、田中雅樹
    • Organizer
      第30回日本神経科学大会
    • Place of Presentation
      横浜
    • Year and Date
      2007-09-10
  • [Presentation] Relaxin3遺伝子の発現調節機構2007

    • Author(s)
      田中雅樹、渡邊義久
    • Organizer
      第34回日本神経内分泌学会
    • Place of Presentation
      前橋
    • Year and Date
      2007-08-05
  • [Remarks]

    • URL

      http://www2.kpu-m.ac.jp/~cellbio/

URL: 

Published: 2010-02-04   Modified: 2016-04-21  

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