2008 Fiscal Year Annual Research Report
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18510173
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| Research Institution | Josai University |
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Principal Investigator |
日比野 康英 Josai University, 薬学部, 教授 (10189805)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
岡崎 真理 城西大学, 薬学部, 助教 (50272901)
神内 伸也 城西大学, 薬学部, 助手 (80433647)
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| Keywords | ヒトゲノム / 核マトリックス / DNA結合蛋白質 / 遺伝子発現 / MAR / SAR / バイオインフォマティクス / 転写因子 |
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| Research Abstract |
ヒトゲノムのMAR/SAR領域を推定した後、生化学的手法によってこの領域による遺伝子発現制御への寄与を明らかにすることを目的とした。バイオインフォマティックスよる推定プログラムの信頼性が確保できたため、核マトリックス蛋白質(P130)の遺伝子発現への関与について調査することにした。昨年度に引き続き本年度も、P-糖蛋白質遺伝子に焦点をあて項目1〜3を実施することにした。
1.P-糖蛋白質遺伝子内の転写因子結合領域の推定
我々は、薬物代謝、薬物排泄ポンプ、細胞周期、酸化ストレスなどの機能に関与する遺伝子のMAR/SAR領域を推定してきた。その中で薬物の排泄ポンプとしての機能を示すP-糖蛋白質遺伝子の発現制御解析に着手した。まず、バイオインフォマティックスに基づいた解析方法に従って、P-糖蛋白質遺伝子のMAR/SAR領域と各種転写因子結合コンセンサス配列を推定した。その結果、P-糖蛋白質遺伝子には3種類のMAR/SAR配列とNF-KBを含む種々の興味深い転写因子の結合コンセンサス配列の存在を確認した。
2.NF-кB結合領域の同定
抗転写因子抗体を用いて、クロマチン免疫沈降(ChIP)によるNF-kBなどの結合部位を転写上流5000塩基の領域内で同定した。抗NF-кB抗体によるChIPアッセイで得られた画分に含まれるDNAを、あらかじめ設計したプライマーを用いて領域を絞り込み、上流4kおよび1kの2ヶ所に結合していると考えられる領域を明らかにするとともに、他の因子の結合領域を同定した。
3.MAR/SAR領域の推定とP130および種々の転写因子との相互作用
MAR/SAR推定領域に相当するプライマーセットを用いて、抗P130抗体を用いたクロマチン免疫沈降(ChIP)によりそれらの相互作用を検討し、極めて巧妙な調節制御を確認した。抗P130抗体によるChIPアッセイで得られた画分に含まれるDNAを解析した結果、MAR/SAR領域のゲノムDNAのエピジェネティックス解析が、遺伝子発現制御に重要な知見をもたらす可能性があるとの結論に至った。従って、次年度に向けて新たな実験計画を申請することにした。
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Research Products
(13 results)
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[Journal Article] Protective effects of a water-soluble extract from culture medium of Ganoderma lucidum mycelia against neuronal damage after cerebral ischemia/reperfusion in diabetic rats.2008
Author(s)
Iwata, N., Okazaki, M., Kasahara, C., Kamiuchi, S., Suzuki, F., Iizuka, H, Hibino Y.
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Journal Title
J. Jap. Soc. Nut. Food Sci. 5
Pages: 119-127
Peer Reviewed
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[Presentation] マウス低酸素脳虚血障害に対する椎茸菌糸体培養培地抽出物(LEM)の保護作用2009
Author(s)
岡崎真理, 玄美燕, 武居由佳, 野口絢加, 麦島麻帆, 湯浅真理子, 堀内重紀, 岩田直洋, 神内伸也, 鈴木史子, 飯塚博, 日比野康英
Organizer
日本薬学会第129年会
Place of Presentation
京都
Year and Date
2009-03-28
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