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2007 Fiscal Year Annual Research Report

分子間相互作用による異物抱合の多様性の解析

Research Project

Project/Area Number 18570134
Research InstitutionToyama Prefectural University

Principal Investigator

生城 真一  Toyama Prefectural University, 工学部, 准教授 (50244679)

Keywords異物代謝 / グルクロン酸 / 相互作用
Research Abstract

本申請では低分子化合物に対する生体防御機構である異物解毒の多様性を生み出すUGT分子間相互作用による活性制御機構を分子レベルで理解することを目的として最終年度は以下の通りに計画を実施した。
1)同時発現系を用いたUGT相互作用の分子機構の解析
酵母におけるUGT発現ミクロソーム膜標品を用いて抗体結合カラムによるイムノアフィニティー実験やタンパク質架橋実験により異種細胞におけるUGT1A1とUGT2B1分子間での相互作用による複合体形成を証明した。また、ラット肝ミクロソームで観測されるようにUGT2B1と他のUGT1A分子種と同時発現系を用いて分子種間相互作用の普遍性を示した。
2)酵母発現系を用いた異種UGTタンパク分子間の相互作用部位の解析
ラットUGTのキメラ分子を構築し、酵母発現系を用いてその抱合活性を測定したところ、いずれのキメラ体も著しい活性低下を示したことから、N末端及び末端ドメインは同一分子種間で密接に関連しあって触媒部位を形成していることが推測された。さらに、相互作用解析方法として表面プラズモン共鳴法に基づいた分子間相互作用解析装置を用いるためにその評価系の構築の検討を行った。分子種に特異的なペプチド抗体をセンサーチップに固定化して相互作用解析をおこなったが予想されるレスポンスが得られなかった。抗体の親和性の低さあるいは立体障害的な効果により結合が阻害されたものと思われる。
以上のように、ラットUGTの異種分子同時発現系を酵母を用いて確立し、抱合活性測定をおこなったが、分子間相互作用装置を用いた相互作用解析までにはいたらなかった。今後、本発現系を用いて分子レベルでのUGT間相互作用の解析と同時にUGTにおいてはこれまで単独分子種発現系のみでしか解析されなかった抱合能の検討が可能になり、従来では肝臓ミクロソーム標品でしか観測されなかった基質特異性の機能発現機構が明らかにされるものと期待される。

  • Research Products

    (12 results)

All 2007

All Journal Article (5 results) (of which Peer Reviewed: 5 results) Presentation (7 results)

  • [Journal Article] Effect of coexpression of UGT1A9 on enzymatic activities of human UGT1Aisoforms2007

    • Author(s)
      Fuziwara, R., et. al.
    • Journal Title

      Drug Metabolism Disposition 35

      Pages: 747,757

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Thyroxine-metabolizing rat UGT1A7 is reglurated by thyroid hormone receptor2007

    • Author(s)
      Emi, Y., et. al.
    • Journal Title

      Endocrinology 148

      Pages: 6124,6133

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Inhibitory effects of adenine nucleotides and related substances on UGT: structure-effect relationship and evidence for an allosteric mechanism2007

    • Author(s)
      Nishimura, Y., et. al.
    • Journal Title

      Bochimca Biophysica Acta 1770

      Pages: 1557,1566

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Protein-protein interactions between rat hepatic cytochromes P450(P450s)and UGTs: Evidence for the functionally active UGT in P450-UGT complex.2007

    • Author(s)
      Ishii, Y., et. al.
    • Journal Title

      Drug Metabolism and Pharmacokinetics 22

      Pages: 367,376

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Hepatic UDP-Glucuronosyltransferases Responsible for Glucuronidation of Thyroxine T_4 in Humans2007

    • Author(s)
      Kato, Y., et. al.
    • Journal Title

      Drug Metabolism Disposition 35

      Pages: 51,55

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] ヒトUDP-グルクロン酸転移酵素による部位特異的なケルセチン抱合反応の解析2007

    • Author(s)
      向後克哉
    • Organizer
      第80回日本生化学会大会及び第30回日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      横浜
    • Year and Date
      20071210-20071215
    • Description
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [Presentation] Caco-2細胞におけるフラボノイド代謝に関わる第二相酵素群の発現2007

    • Author(s)
      室田佳恵子
    • Organizer
      日本農芸化学会2007年度大会
    • Place of Presentation
      東京
    • Year and Date
      20070324-20070327
    • Description
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [Presentation] Molecular basis of glucuronidation of quercetin by rat and human UGT2007

    • Author(s)
      Ikushiro, S.
    • Organizer
      3rd International Conference on Polyphenols and Health
    • Place of Presentation
      京都
    • Year and Date
      2007-11-25
  • [Presentation] シトクロムP450 3A4(CYP3A4)とUGT1Aサブファミリーの相互作用について2007

    • Author(s)
      追崎俊也
    • Organizer
      フォーラム2007:衛生薬学・環境トキシコロジー
    • Place of Presentation
      大阪
    • Year and Date
      2007-11-02
  • [Presentation] MONOSPECIFIC ANTIPEPTIDE ANTIBODIES AGAINST HUMAN HEPATIC UDP-GLUCURONOSYLTRANSFERASE 1A SUBFAMILY(UGT1A)ISOFORMS2007

    • Author(s)
      Ikushiro, S.
    • Organizer
      第8回国際薬物動態学会及び第22回日本薬物動態学会年会
    • Place of Presentation
      仙台
    • Year and Date
      2007-10-10
  • [Presentation] GLUCURONIDATION OF A NOVEL SMALL MOLECULE AP-1 INHIBITOR T-5224 IN HUMAN LIVER AND INTESTINAL MICROSOMES2007

    • Author(s)
      Uchihashi, S.
    • Organizer
      第8回国際薬物動態学会及び第22回日本薬物動態学会年会
    • Place of Presentation
      仙台
    • Year and Date
      2007-10-10
  • [Presentation] ヒトUDP-グルクロン酸転移酵素によるケルセチン抱合反応の解析2007

    • Author(s)
      生城真一
    • Organizer
      日本ビタミン学会第59回大会
    • Place of Presentation
      長崎
    • Year and Date
      2007-05-25

URL: 

Published: 2010-02-04   Modified: 2016-04-21  

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