2007 Fiscal Year Annual Research Report
α1-酸性糖タンパク質分子上における薬物結合部位のマッピング
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18590035
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| Research Institution | Kumamoto University |
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Principal Investigator |
丸山 徹 Kumamoto University, 薬学部, 教授 (90423657)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
小田切 優樹 熊本大学, 大学院・医学薬学研究部, 教授 (80120145)
川原 浩一 熊本大学, 大学院・医学薬学研究部, 助教 (10347015)
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| Keywords | 生物物理化学 / タンパク結合 / α_1-正酸性糖タンパク質 |
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| Research Abstract |
血清タンパク質の一つであるα_1-酸性糖タンパク質(AGP)は、塩基性薬物の主要結合タンパク質として機能しているものの、リガンド結合部位の詳細な位置関係、いわゆるトポロジーは全くと言ってよい程明らかにされていない。本研究の目的は、光アフィニティラベル法、部位特異的変異法及びドッキングシミュレ-ションなど種々の方法によりその詳細を明らかにし、薬物結合部位のトポロジー解析を行うことである。
1、 F1*S体に選択的に結合することが知られているプラゾシンをアジド化することにより、光反応性を持った[3^H]アジドプラゾシンを得ることに成功した。その後、F1*S体を光ラベル化後、これまでと同様の手法で酵素処理によりペプチドへ断片化し、放射活性を持ったペプチド断片を分離・精製し、エドマン分解によるアミノ酸配列解析及びマススペクトル法によりラベル化されたアミノ酸残基の同定を行った。その結果、<64>^Glu、<92>^Val、<98>^Phe、<100>^Hisが結合に関与している可能性が強く示唆された。現在、Kopecky博士らがホモロジーモデウシグにより、AGPの薬物結合部位における多型間の相違についてトポロジー解析を行っている。
2、 大腸菌で得られた組換え型AGP(F1*S体とA体)の作製に成功した。その後、Crystal screenやWizardなどの結晶化キットを用いて組換え型AGPの結晶化を行い、両者とも結晶化に成功した。現在、最適な結晶化条件を検討しており、近い将来、X線結晶構造解析により、それぞれの立体構造を解明できると考えている。また、得られたF1*S体とA体を用いてそれぞれに選択的に結合する薬物とのドッキングシミュレーションを行い、薬物結合サイトのトポロジー解析を行う予定である。
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