| Research Abstract |
最近私たちは,pre-B細胞株Nalm-6を用いてヒト遺伝子のノックアウトを効率良く行うためのシステムを開発した.そこで本研究では,このヒトNalm-6細胞を用いて,DNA鎖切断修復への関与が示唆されるさまざまなヒト遺伝子を破壊した変異細胞株(ノックアウト細胞)を系統的に作製し,その機能を逆遺伝学的に解析すること目的として研究を進めた.こうした研究により,ヒト細胞におけるさまざまなDNA鎖切断修復経路の詳細な分子機構やこれら経路の細胞内での役割分担を明らかにすることが可能になる.本年度は,Rad54やXrcc3,Ku70,Ku80,DNA ligase III,DNA ligase IV,DNAポリメラーゼβなどDNA一本鎖・二本鎖切断修復に関わる遺伝子について,順次ジーンターゲティングを行うとともに,これら遺伝子の二重変異株の作製を進めた.これら一連の変異株を利用して,シスプラチンやトポイソメラーゼ阻害剤などの抗がん剤に対する感受性を詳細に解析した.また,p53とBLMとの遺伝学的相互作用や,MUS81とFANCBとの遺伝学的相互作用について詳細な解析を行った.さらに,非相同組換え(ランダムインテグレーション)の機構の全容を解明し,あらゆるヒト細胞において高効率ジーンターゲティングを可能にする方策を見いだすことを目的として,siRNA法による遺伝子ノックダウン法により,ヒト細胞に存在する3種類のDNA ligase(I, III, IV)のランダムインテグレーションへの関与を調べた.
|
