2006 Fiscal Year Annual Research Report
トポイソメラーゼI阻害薬の腎排泄機構の解明に基づく個別化投与設計法の基盤構築
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18590139
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Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Research Institution | Mie University |
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Principal Investigator |
水谷 秀樹 三重大学, 医学部附属病院, 講師 (80397504)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
奥田 真弘 三重大学, 医学部附属病院, 教授 (70252426)
平工 雄介 三重大学, 大学院医学系研究科, 講師 (30324510)
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| Keywords | 薬物トランスポータ / 薬物腎排泄 / 抗がん剤 / イリノテカン / トポテカン / アポトーシス |
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| Research Abstract |
イリノテカン及びトポテカンの腎排泄機構を明らかにするため、培養細胞を用いた輸送実験、小動物を用いたクリアランス実験を実施した。さらに、イリノテカン、トポテカンによる臓器障害をアポトーシス誘導の観点から評価した。
培養細胞を用いた輸送実験、小動物を用いたクリアランス実験を実施する前に、イリノテカン及びトポテカンの定量方法について検討した。その結果、定量方法として、逆相系のカラムで蛍光検出器付き高速液体クロマトグラフィーを用いる方法で定量できることが明らかになった。現在、培養細胞を用いた輸送実験、小動物を用いたクリアランス実験が進行中である。
イリノテカン、トポテカンによる臓器障害をアポトーシス誘導の観点から評価することについては、ヒト培養細胞HL-60およびHL-60由来で活性酸素種の1つである過酸化水素の耐性株であるHP100細胞を用いた。実験は、イリノテカンの代謝活性物であるSN-38とトポテカンを一定時間培養した。アポトーシスに顕著な核DNA断片化(DNAラダー)の検出は、細胞からDNAを抽出し、アガロースゲル電気泳動法を用いて行った。細胞内の活性酸素レベルとミトコンドリア膜電位の変化は、細胞を染色し、フローサイトメトリーにより解析した。その結果、それぞれの薬物処理による核DNAの断片化は、HP100に比べHL-60でより短時間に起こり、アポトーシスが誘導されることを確認した。HP100はHL-60の18倍のカタラーゼ活性を有することから、SN-38、トポテカンのアポトーシスには、過酸化水素が関与することが示唆された。現在、フローサイトメトリーを用いてアポトーシス誘導機構の詳細を解析し、臓器障害との関連を検討している。
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