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2007 Fiscal Year Annual Research Report

ニーマンピックC1タンパク質のユビキチン化に関する研究

Research Project

Project/Area Number 18590295
Research InstitutionTottori University

Principal Investigator

二宮 治明  Tottori University, 医学部, 教授 (80212124)

Keywordsニーマンピック / コレステロール / ユビキチン / プロテアゾーム
Research Abstract

ニーマンピックC1蛋白質(NPC1)のプロテアゾーム分解の生化学的機序を解析した。
まず、プロテアゾーム阻害薬MG132に対する種々の変異NPC1の反応性を検討し、野生型と同じ反応を示すことを確認した。このことは、NPC1のユビキチン化とそれに引き続くプロテアゾーム分解は、NPC1の生理機能とは関係なく、その蛋白質の合成過程で生じることを意味する。
次に、NPC1の合成過程に関与する分子シャペロンの同定を試みた。COS細胞発現系において、Flag-NPC1はheat shock protein70(HSP70),HSP90およびcalnexinと共免沈され、これらのシャペロンがNPC1の合成過程に関与するものと考えられた。
さらに、NPC1をユビキチン化するE3リガーゼの同定を試みた。COS細胞発現系においてFlag-NPC1とCHIP(C-terminus of HSP70-interacting protein)を共発現するとMG132に対する反応性が亢進し、CHIPを阻害するBAG-2の発現により反応性が低下した。これらの結果から、NPC1をユビキチン化する主要なE3リガーゼはCHIPであると結論した。
最後に、ユビキチン化修飾を受けるNPC1のリジン残基の同定を試みた。MALDI-TOF/MASS解析により、NPC1のサイトゾル側に位置する12個のリジン残基のうちK318,K792,K1180の3つがユビキチンのアクセプターになることが予想された。各々のリジン残基を置換した変異体を作製してその発現実験を行ったところ、ワイルドタイプの数倍の発現量を示すことがわかった。
以上の結果により、NPC1のプロテアゾーム分解の詳細な生化学的機序が明らかになった。

  • Research Products

    (5 results)

All 2007 Other

All Journal Article (3 results) (of which Peer Reviewed: 3 results) Presentation (1 results) Remarks (1 results)

  • [Journal Article] Amyloid beta inhibits ectodomain shedding of N-cadherin via down-regulation of cell-surface NMDA receptor.2007

    • Author(s)
      Uemura, et. al.
    • Journal Title

      Neuroscience 145

      Pages: 5-10

    • Description
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Endosomal accumulation of Toll-like receptor 4 causes constitutive secretion of cytokines and activation of signal transducers and activators of transcription in Niemann-Pick disease type C(NPC)fibroblasts: a potential basis for glial cell activationin the NPC brain.2007

    • Author(s)
      Suzuki, et. al.
    • Journal Title

      J. Neurosci. 27

      Pages: 1879-1891

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Presenilin 1 is involved in the maturation of beta-site amyloid precursor protein-cleaving enzyme 1(BACE1).2007

    • Author(s)
      Kuzuya, et. al.
    • Journal Title

      J. Neurosci. Res. 85

      Pages: 153-165

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Proteasomal degradation of NPC1.2007

    • Author(s)
      Ninomiya H.
    • Organizer
      Annual Scientific Conference on NPC
    • Place of Presentation
      Tucson, U. S. A.
    • Year and Date
      2007-06-07
  • [Remarks]

    • URL

      http://www.asahi-net.or.jp/~ev6h-nnmy/

URL: 

Published: 2010-02-04   Modified: 2016-04-21  

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