2006 Fiscal Year Annual Research Report
BAC改変EBウイルス産生のためのパッケージングシステムの開発
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18590445
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Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
神田 輝 北海道大学, 遺伝子病制御研究所, 助手 (50333472)
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| Keywords | EBウイルス / 大腸菌人工染色体(BAC) / パッケージングシステム |
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| Research Abstract |
BAC(bacterial artificial chromosome)システムは、EBウイルスゲノムDNAを大腸菌内で迅速かつ確実に改変できる系として有用である。しかしながら改変したEBウイルスゲノムのBACクローンDNAをもとに、組換えEBウイルス産生細胞を樹立する過程の効率化が課題として残されている。
そこで、BACクローンDNAの導入効率に優れるEBウイルス陽性細胞株であるP3HR-1細胞をもとに、BACクローンのパッケージングシステムの樹立を試みた。
P3HR-1細胞内のEBウイルスゲノムのターミナルリピート配列(パッケージングシグナル)を除去するためのターゲッティングコンストラクトを作製し、これをP3HR-1細胞へトランスフェクションして、細胞内相同組み換えによりターミナルリピート配列が除去された変異ウイルスゲノムを含む細胞クローンを選択した。この細胞クローンから、変異EBウイルスゲノムのみを有する細胞(パッケージング細胞)の樹立を試みたが、野生型EBウイルスゲノムを完全に除去することができず、不成功に終わった。しかも、野生型EBウイルスとBACクローンDNAとの間に組換えが生じているというデータも得られ、これはP3HR-1細胞を用いたパッケージングシステムの限界を考えられた。
そこで、P3HR-1以外のEBウイルス陽性細胞株であるB95-8細胞、およびその派生株についてパッケージング細胞としての適性を検討した。これらの細胞株を用いて、BACクローンのトランスフェクションおよび薬剤選択を行うことで、完全長のBACクローンがエピゾームとして導入された細胞を比較的容易に得ることができた。以上より、B95-8細胞、およびその派生株をもとにしたパッケージング細胞の実現可能性が示された。
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